裸鼠坐骨神经肿瘤浸润模型

（一）目的：

建立实验室动物建模的标准操作规程。

（二）适用范围：

本SOP适应于科沿有道实验室动物实验所有工作人员。

（三）主体内容：

外周神经浸润(PNI)是复杂的病理过程，涉及肿瘤细胞、神经纤维及肿瘤基质，缺乏理想疾病模型限制了PNI的研究。较早期体外研究利用Boyden小室铺Matrigel胶模拟基底膜，寻找和验证与肿瘤侵袭或转移相关神经营养因子，但这种方法未能直接说明肿瘤细胞浸润神经。坐骨神经浸润模型即将肿瘤细胞接种于坐骨神经鞘内，模拟神经微环境，观察肿瘤细胞在神经内的生长特性及其对坐骨神经的浸润情况。Mashour等首次建立坐骨神经浸润模型，用于评估溶瘤病毒对神经转移瘤的治疗效果。此模型通过评估动物坐骨神经的功能间接评估肿瘤PNI情况，为实验过程中PNI程度提供了一个可观察指标。

坐骨神经浸润模型可通过观察坐骨神经功能间接评估PNI，但此时肿瘤已经显著长大、浸润坐骨神经，而PNI的发生早期可能只涉及少量肿瘤细胞，在明显成瘤前已经开始。由于坐骨神经较为表浅，走形固定，较多研究者通过B超、MRI等影像检查手段评估肿瘤与神经的关系，即神经变粗、周围有组织增生等。但影像学改变是肿瘤沿神经转移间接证据，并不能直接说明是肿瘤细胞侵犯神经，最终仍需将动物处死后进行病理学检验证实。

1.实验动物：

品系：Balb/C-nude小鼠；

性别：不限；

周龄：6-8周；

体重：18-20g。

2. 操作流程：

1）动物适应性饲养7天；

2）麻醉机麻醉裸鼠，75%酒精消毒皮肤，暴露左侧坐骨神经深达股二头肌。应用显微注射法将MiaPaCa2细胞注入坐骨神经的神经束膜，远端直达胫神经和腓总神经分叉处。细胞浓度为1×10^5/μL，应用注射器2min内缓慢注入10μL癌细胞悬液，建立坐骨神经浸润模型。

3.实验结果：

1)6周后，摘取移植瘤，拍摄大体照片；

 2)福尔马林固定，石蜡包埋，进行HE染色。