Mouse IL-12p70 ELISA

Mouse IL-12p70 ELISA，即小鼠白细胞介素12p70酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测小鼠血清、血浆或细胞培养上清液中的IL-12p70（白细胞介素12的一种形式）的ELISA（酶联免疫吸附测定）试剂盒。以下是关于Mouse IL-12p70 ELISA的详细解释和用途：

一、Mouse IL-12p70 ELISA概述

定义：

• Mouse IL-12p70 ELISA试剂盒是一种基于抗原抗体反应原理的生化检测工具，通过酶促反应将抗原抗体反应的特异性转化为可测定的光信号，从而实现对小鼠体内IL-12p70的定量检测。

组成：

• 该试剂盒通常包含预包被的酶标板、标准品、检测抗体、酶结合物、洗涤液、显色剂、终止液等关键组分。酶标板上预包被了特异性针对小鼠IL-12p70的捕获抗体。

原理：

• 试剂盒采用双抗体夹心ELISA法进行检测。在检测过程中，样本中的IL-12p70首先与酶标板上的捕获抗体结合，形成抗原抗体复合物。随后加入生物素化的检测抗体，该抗体与已结合的IL-12p70再次结合，形成夹心复合物。最后加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素（SA-HRP），通过生物素与链霉亲和素的特异性结合，将酶连接在夹心复合物上。在加入显色剂后，酶催化显色剂产生颜色反应，颜色深浅与样本中IL-12p70的浓度成正比。通过酶标仪检测特定波长下的吸光度值，即可实现对IL-12p70的定量检测。

二、Mouse IL-12p70 ELISA的用途

1. 科学研究：
   • 在生命科学、分子生物学、免疫学等领域的研究中，Mouse IL-12p70 ELISA试剂盒被广泛用于检测小鼠体内IL-12p70的含量变化，进而探究其在细胞增殖、分化、免疫反应等过程中的作用机制。
   • 有助于研究IL-12p70在感染、炎症、肿瘤等病理过程中的作用，以及与其他细胞因子的相互作用关系。
2. 药物研发：
   • 在药物研发过程中，该试剂盒可用于评估药物对小鼠体内IL-12p70水平的影响，为药物的疗效评价提供实验依据。
   • 例如，在开发免疫调节药物时，可以通过检测药物对小鼠体内IL-12p70水平的影响来评估其对免疫系统的调节作用。
3. 疾病诊断与监测：
   • 虽然Mouse IL-12p70 ELISA试剂盒主要用于科研和药物研发领域，但其在某些疾病的诊断与监测中也具有一定的参考价值。
   • 例如，IL-12p70在某些自身免疫性疾病、感染性疾病等患者的血清中含量可能发生变化，因此通过检测小鼠体内IL-12p70的水平变化，有助于疾病的早期诊断和病情监测。

三、注意事项

• 在使用Mouse IL-12p70 ELISA试剂盒时，应严格按照说明书进行操作，确保实验结果的准确性和可靠性。
• 试剂盒各组分应妥善保存，避免污染和失效。
• 样本的采集、处理和保存应严格按照规定进行，以确保样本中IL-12p70的稳定性和活性。
• 实验结果应结合其他临床信息进行综合判断，以提高诊断的准确性和可靠性。

综上所述，Mouse IL-12p70 ELISA试剂盒是一种重要的生化检测工具，在科学研究、药物研发和疾病诊断与监测等领域具有广泛的应用价值。

四、产品说明书

小鼠白介素12酶联免疫试剂盒
Mouse IL-12 ELISA Kit

用于血清，血浆，细胞上清及其他生物体液中小鼠白介素12的检测
货号：A1010A0212   96 tests
仅供科研使用，勿用于药物、临床检测

检测原理：
本试剂盒采用双抗夹心法。用抗Mouse IL-12抗体包被于酶标板上，标准品和样本中的Mouse IL-12与单抗结合，加入生物素化的抗Mouse IL-12，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的streptavidin与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，最后加终止液，在450nm处测OD值，Mouse IL-12浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中Mouse IL-12的浓度。

试剂盒组份（2-8℃保存）

1. Mouse IL-12酶标板（coated wells），12*8wells（单孔可折），1 plate；
2. Mouse IL-12 标准品2.5ng（standards），2 vial；
3. Mouse IL-12  150×生物素化二抗（Biotinylated Antibody），80μL，1 vial；
4. Mouse IL-12  100×亲和链霉素辣根过氧化物酶结合物（Streptavidin HRP Conjugate），120μL，1 vial；
5. 稀释液I（Assay Diluent I），30 mL，1 vial；
6. 稀释液 II（Assay Diluent II），12 mL，1 vial；
7. 稀释液 III（Assay Diluent III），12 mL，1 vial；
8. 20×浓缩洗涤液（Wash Buffer），30 mL，1 vial；
9. 显色液A（Color Reagent A），6 mL，1 vial；
10. 显色液B（Color Reagent B），6 mL，1 vial；
11. 终止液（Stop Solution），6 mL，1 vial；
12. 封板膜，3张；

1. 单道或多道（8道或12道）移液器及移液器枪头：10-200μL和50-1000μL；
2. 多道（8道或12道）移液器试剂存放槽；
3. EP管及试剂配置容器；
4. 圆柱形量筒：100mL，200mL，500mL和1L；
5. 可在450nm处进行读数的酶标仪； 洗瓶或自动洗板机；
6. 蒸馏水或去离子水；封板膜或板盖；乳胶手套；吸水纸；

1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
3. 消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。
4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。
5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
6. 在储存和温育时避免强光直接照射。
7. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发出来的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反映试剂的生物活性。
8. 标准孔及待测样本均建议做复孔，每次测定应同时做标准曲线，请合理安排预实验。
9. 不能使用过期产品。

1. 样本：本试剂盒可检测血清，血浆（EDTA，肝素抗凝），细胞培养上清液，组织匀浆等生物学样本。样本储存要求2-8℃保存48小时以内，更长时间需冷冻（-20℃或-80℃）保存，避免反复冻融。如样本Mouse IL-12 含量过高，可用稀释液 I进行稀释。
2. 标准品配制：将2.5ng标准品离心后，加入1000μL的稀释液 I配制成浓度为2500pg/mL的标准品溶液（标准曲线最高点），轻轻振荡混匀。再准备六支EP管，分别加入200μL稀释液I，吸取2500pg/mL的标准品溶液200μL加入第一管中，充分混匀，从第一管中取200μL加到第二管中，充分混匀，如此反复对半稀释至浓度39.06pg/mL的标准品溶液；另取一空白EP管加入足量的稀释液I，设为空白对照。

1. 1×Biotinylated Antibody：用稀释液 II按1:150倍稀释150×生物素化二抗。
2. 1×Streptavidin-HRP Conjugate：用稀释液 III按1:100倍稀释100×亲和链霉素辣根过氧化物酶结合物。
3. 显色液配制：A液和B液做1：1配制，即配即用，可根据使用量临时配制（使用前15分钟内配制），不要配制过多的显色液。
4. 1×洗涤液配制：用蒸馏水1：20倍稀释（示例：1mL 20×浓缩洗涤液加入19mL蒸馏水）；

1. 加样：加入相对应标准品100μL，加入待测样品50μL、稀释液I  50ul（样本已经稀释2倍回归计算时需乘以稀释倍数2）， 封板，充分混匀，室温温育120分钟；
2. 洗板：用1×洗涤液将反应板充分洗涤3次，在吸水纸上拍干；
3. 每孔加入已稀释1× Biotinylated Antibody 100μL，封板，室温温育120分钟；
4. 洗板：同第二步；
5. 每孔加1×Streptavidin- HRP 100μL，封板，室温温育20分钟；
6. 洗板：同第二步；
7. 每孔加入已配制的显色工作液100μL，将反应板置暗处室温5-15分钟，每隔一段时间，目测标准品和样本的板孔变为蓝色， 酶标仪620-630nm 进行读数并保存（第一次数据），标准品孔的最高点读数OD 值如果超过0.8，请及早终止。如果标准品最高点读数没有超过0.4，可以延长室温温育时间为30min，再进行下一步终止反应。
8. 每孔加入50μL终止液，混匀；如果颜色呈现绿色或者颜色的变化明显不均匀，请轻轻叩击板框，充分混匀。
9. 在5分钟内进行酶标仪读数，设置双波读数（第二次数据），酶标仪主波长450nm，副波长620-630nm检测吸光度。校准后的OD 值为450 nm 的测定值减去 620-630 nm 的测定值。仅使用450 nm 测定会导致OD值偏高，并且准确度降低。
10. 如果酶标仪没有620-630nm的波长，也可以根据酶标仪的情况选择570-650nm的波长作为替代。

1. 所有OD值都应减除空白值后再计算；先计算450-630nm的数据（第二次数据）；
2. 以标准品2500, 1250, 625, 312.5, 156.25, 78.13, 39.06, 0pg/mL为横坐标，450-630nm的OD值为纵坐标，画出标准曲线。
3. 根据样本OD值在该曲线图上查出相对应Mouse IL-12含量，如样本有稀释，请再乘上稀释倍数。如果样本没有进行预稀释，则稀释倍数为2 。计算出的数值应该乘以2。
4. 推荐采用双对数方式进行数据拟合。如下是示例数据：