- ￥600 - 3200
- 上海莼试
- CS-01Y75507
- 国产
- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 技术资料
- 库存：
54
- 英文名：
A 582941
- CAS号：
848591-90-2
- 供应商：
上海莼试
- 保存条件：
Desiccate at RT
- 规格：
10mg 50mg
本产品仅供科学实验研究使用! 不能用于临床或动物诊断！
产品描述:
A 582941 is a highly selective partial agonist of α7 nicotinic acetylcholine receptors (nAChRs), with an EC50 value of 4260 nM to human α7 nAChRs [1].nAChRs are a family of pentameric ligand-gated ion channels. They are derived from multiple α (α2-α10) and β (β2-β4) subunit genes. α7 nAChR receptor exhibits higher Ca2+ permeability than other nAChR combinations. These receptors modulate the release of multiple neurotransmitters, including acetylcholine (ACh), glutamate, and GABA [1].In FLIPR, A 582941 did not activate recombinant heteromeric nAChRs (α4β2, α3β2, α3β4, or α4β4) according to Ca2+ dynamics results. In IMR-32 cells expressing native human α3β4 nAChRs, A 582941 did not produce an agonist effect (with an efficacy less than 20% at concentrations up to 100,000 nM). In Xenopus oocytes expressing an α9α10 nAChR construct, A 582941 at concentrations up to 100,000 nM did not evoke currents. With respect to nAChRs, A 582941 activated only the homomeric α7 subtype [1].In a rat model of short-term memory based on olfactory cues, saline-treated adults used investigation times during the second session nearly equal to the first session, exhibiting little recognition of the juvenile. Treatment with A 582941 in adult rats resulted in a dose-related reduction in the exploration time during the second session compared with the first session, exhibiting improved recognition of the juvenile [1].
化学性质:
规格：10mg 50mg
CAS：848591-90-2
别名：
化学名：(3aR,6aR)-2-methyl-5-(6-phenylpyridazin-3-yl)octahydropyrrolo[3,4-c]pyrrole
分子式：C17H20N4
分子量：280.37
溶解度：<28.04mg/ml in DMSO; <14.02mg/ml in 1eq. HCl
储存条件：Desiccate at RT
General tips：For obtaining a higher solubility , please warm the tube at 37 ℃ and shake it in the ultrasonic bath for a while.
Shipping Condition: Evaluation sample solution : ship with blue ice All other available size: ship with RT , or blue ice upon request
使用方法:
1. 常用筛选浓度
注意：用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve)，即剂量反应性曲线，来确定最佳筛选浓度。
一般而言，哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 杀灭曲线的建立
注意：为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度，可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现，至少选择5个浓度。
1) 第一天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜;注：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。
2) 根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml，然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。
3) 第二天：替换旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4) 接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5) 按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10天)内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。
3. 稳定转染细胞的筛选
1) 转染48h后，用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。
注意：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤。则当细胞过于稠密，其效率会降低。为了得到较好的筛选效果，最好将细胞稀释至丰度不超过25%
2) 每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。
3) 筛选7天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。
4) 挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5) 之后更换正常培养基培养即可。
蛋白酶抑制剂混合物实验步骤:
(1)A 582941实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::yi戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的yi戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::yi戊醇(25:24:1)抽提两次,:yi戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
公司正在出售的产品:
| 产品名称 | A 582941 | 产品货号 | CS-01Y75507 |
| 规格 | 10mg 50mg | CAS号 | 848591-90-2 |
| 含量 | >98.00% | 分子式 | C17H20N4 |
| 分子量 | 280.37 | 用途 | 仅供科研研究使用 |
A 582941 is a highly selective partial agonist of α7 nicotinic acetylcholine receptors (nAChRs), with an EC50 value of 4260 nM to human α7 nAChRs [1].nAChRs are a family of pentameric ligand-gated ion channels. They are derived from multiple α (α2-α10) and β (β2-β4) subunit genes. α7 nAChR receptor exhibits higher Ca2+ permeability than other nAChR combinations. These receptors modulate the release of multiple neurotransmitters, including acetylcholine (ACh), glutamate, and GABA [1].In FLIPR, A 582941 did not activate recombinant heteromeric nAChRs (α4β2, α3β2, α3β4, or α4β4) according to Ca2+ dynamics results. In IMR-32 cells expressing native human α3β4 nAChRs, A 582941 did not produce an agonist effect (with an efficacy less than 20% at concentrations up to 100,000 nM). In Xenopus oocytes expressing an α9α10 nAChR construct, A 582941 at concentrations up to 100,000 nM did not evoke currents. With respect to nAChRs, A 582941 activated only the homomeric α7 subtype [1].In a rat model of short-term memory based on olfactory cues, saline-treated adults used investigation times during the second session nearly equal to the first session, exhibiting little recognition of the juvenile. Treatment with A 582941 in adult rats resulted in a dose-related reduction in the exploration time during the second session compared with the first session, exhibiting improved recognition of the juvenile [1].
化学性质:
规格：10mg 50mg
CAS：848591-90-2
别名：
化学名：(3aR,6aR)-2-methyl-5-(6-phenylpyridazin-3-yl)octahydropyrrolo[3,4-c]pyrrole
分子式：C17H20N4
分子量：280.37
溶解度：<28.04mg/ml in DMSO; <14.02mg/ml in 1eq. HCl
储存条件：Desiccate at RT
General tips：For obtaining a higher solubility , please warm the tube at 37 ℃ and shake it in the ultrasonic bath for a while.
Shipping Condition: Evaluation sample solution : ship with blue ice All other available size: ship with RT , or blue ice upon request
使用方法:
1. 常用筛选浓度
注意：用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve)，即剂量反应性曲线，来确定最佳筛选浓度。
一般而言，哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 杀灭曲线的建立
注意：为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度，可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现，至少选择5个浓度。
1) 第一天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜;注：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。
2) 根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml，然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。
3) 第二天：替换旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4) 接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5) 按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10天)内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。
3. 稳定转染细胞的筛选
1) 转染48h后，用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。
注意：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤。则当细胞过于稠密，其效率会降低。为了得到较好的筛选效果，最好将细胞稀释至丰度不超过25%
2) 每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。
3) 筛选7天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。
4) 挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5) 之后更换正常培养基培养即可。
蛋白酶抑制剂混合物实验步骤:
(1)A 582941实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::yi戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的yi戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::yi戊醇(25:24:1)抽提两次,:yi戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
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| CK-19 细胞角蛋白19ELISA检测试剂盒 | GAD 谷氨酸脱羧酶ELISA检测试剂盒 |
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