细胞膜蛋白提取试剂盒

产品简介：
细胞膜蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种原代或传代细胞样本中提取膜蛋白，提取
的膜蛋白纯度高，不含核蛋白和胞浆蛋白。提取过程简单方便。制备的膜蛋白保持天然活性，而且
绝少交叉污染。
本试剂盒提取的蛋白可用于 Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、
Gel shift 凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究。
本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。
本试剂盒不含有EDTA，与金属螯合层析等下游应用兼容。
本试剂盒提取得蛋白样本含有高浓度得盐成分，不可直接用于2D电泳，需要除盐后再用于 2D
电泳。
本试剂盒提取的膜蛋白为细胞的总膜蛋白。

 

常见问题分析：
1. 蛋白浓度低？
膜蛋白丰度比较低，在条件允许的情况下，需要尽可能加大细胞的上样量以提高膜蛋白浓度。
处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当增加试剂 A 的处理时间即可。
最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
2. 用什么方法定量蛋白？
建议用 BCA 法。不适合用 Bradford 法，因为试剂 A 中含有干扰 Bradford 法的组份，导致定量不
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准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用 Bradford 法定量。
3. 提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的
破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。
4. 膜蛋白电泳没有条带？
膜蛋白样品通常浓度较低，电泳前一定要进行蛋白定量，以保证电泳是蛋白上样量足够。
膜蛋白提取好后，用溶解液充分溶解后，可以超声处理一下，再进行蛋白定量。
蛋白加Loading buffer后可以不用煮沸，采用50℃保温30分钟。
蛋白Loading buffer中SDS终浓度含量可以提高至3%-10%。
有些样品的膜蛋白含量太低，可以使用丙 酮沉淀膜蛋白，再使膜蛋白溶解于上样缓冲液中，一般可
以跑出清晰的蛋白条带。
电泳时最好采用低电压低电流电泳。
膜蛋白丰度通常较低，有条件可以尝试用银染染色。

注意事项：
1. 正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得最佳实验效果。
2. 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖
时试剂损失。
3. 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
4. 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
5. 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗
并彻底清除残留清洁剂。
6. 实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理.