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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商:
北京沃比森科技有限公司
- 库存:
现货
- 规格:
10ml
碘化丙啶(PI)溶液(50ug/ml)
propidium iodide (PI) Solution
Product Number:C0660-122
产品描述:
碘化丙啶(PI)是一种核酸荧光染料,它不能透过完整的细胞膜,但能够透过死细胞和凋亡中晚期细胞的细胞膜而使细胞核染色。因此,PI 作为荧光探针常用于细胞凋亡(apoptosis)或细胞坏死(necrosis) 的检测。在流式细胞分析中,PI 常与其他染料如Calcein-AM、Hoechst 33258 或Hoechst 33342 联合使用,来区分凋亡早晚期细胞以及死细胞。此外,PI 也常作为多色荧光染色的复染剂使用。
产品描述:
本产品为液体(1X),已经过 0.1μm过滤,不含细菌、支原体等色。
操作步骤:
操作步骤(仅供参考):
细胞样品的制备:
贴壁细胞:
① 收集上述细胞悬液到离心管内。
② 4℃离心,使细胞沉到管底。小心吸取上清并丢弃,可留大约 50ul 培养液,以免吸走细胞,
③ 加入约1ml 提前预冷的PBS,重悬细胞,并转移至 1.5ml 无菌离心管。
④ 4℃离心,使细胞沉到管底。
⑤ 小心吸取上清并丢弃,可留大约 50ulPBS,以免吸走细胞。
⑥ 轻轻弹击离心管底以适当分散细胞,避免细胞成团。
(2) 悬浮细胞:
① 4℃离心,使细胞沉到管底。
② 小心吸取上清并丢弃,可留大约 50ul 培养液,以免吸走细胞。
③ 加入约1ml提前预冷的 PBS, 重悬细胞,并转移至 1.5ml 无菌离心管。
④ 4℃离心,使细胞沉到管底。
⑤ 小心吸取上清并丢弃,可留大约 50ul PBS, 以免吸走细胞。
⑥ 轻轻弹击离心管底以适当分散细胞,避免细胞成团。
细胞的固定:加入1ml冰浴预冷70%乙醇中,轻轻吹打混匀,4℃条件下
固定2h或更长时间。4C固定 12~24h 可能效果更佳。
3、细胞的清洗:
① 4℃离心,使细胞沉到管底。
② 小心吸取上清并丢弃,可留大约 50 ul 溶液,以免吸走细胞
③ 加入约1ml 提前预冷的 PBS,重悬细胞,并转移至1.5ml 无菌离心管。
④ 4℃离心,使细胞沉到管底。
⑤ 小心吸取上清并丢弃,可留大约 50ul PBS,以免吸走细胞。
4、PI染色:在每个待检细胞样品中加入 500ul 配制好的PI染色工作液,轻轻重悬细胞沉淀,置于37℃避光水浴 30min.
5、检测与分析:用流式细胞仪在激发波长 488nm 波长处检测红色荧光,同时检测光散射情况。采用适当分析软件进行细胞 DNA或 RNA 含量分析和光散射分析。
注意事项:
1、荧光染料都存在淬灭的问题,建议染色后尽快检测。
2、为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。
3、在为了获得细胞沉淀的离心的过程中,对于特殊细胞,如果细胞沉淀不充分,可以适当提高离心力或延长离心时间。
4、如果用于组织的细胞周期与细胞调亡检测,则必须把组织消化后,制备成单细胞悬液,才可以进行检测,
5、可溶于水或 DMSO。本品用 DMSO 溶解,因 DMSO的熔点是 18.5℃,使用前请放置到室温充分溶解。
保存条件: -20℃
规 格: 10mL/瓶
有效期: 12个月
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定制服务:
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文献和实验组织中的细胞周期和凋亡检测方法之一--PI法schoman无论是肿瘤或其它正常新鲜组织均可用PI(碘化丙啶)的方法来检测,这是一种常见而且便宜的方法。主要操作步骤如下:1、组织块用0.25%胰酶消化30min-1h。2、200-400目筛网过滤细胞,获得单细胞悬液。3、75%乙醇(-20度预冷)固定细胞1h。4、加入PI(终浓度50ug/ml)和无DNA酶污染的RNA酶(终浓度50ug/ml)1ml染色30min-1h。5、流式细胞仪检测细胞周期和凋亡。注意事项: 1、组织消化后使细胞
,PI能够透过细胞膜而使细核红染。因此将Annexin-V与PI匹配使用,就可以将凋亡早晚期的细胞以及死细胞区分开来。 方法 1、悬浮细胞的染色:将正常培养和诱导凋亡的悬浮细胞(0.5~1×106)用PBS洗2次,加入100ul Binding Buffer和FITC标记的Annexin-V(20ug/ml)10ul,室温避光30min,再加入PI(50ug/ml)5ul,避光反应5min后,加入400ul Binding Buffer,立即用FACScan进行流式细胞术定量检测(一般不超过
准备工作: DF12 加入0.1%BSA,100ml,取10ml冰浴,40ml放入孵箱;其余的放入4度; DNase I 100*; PI:50ug/ml; Hoechst33342: 1000ug/ml(all from Sigma) 计数板,冰盒;各种离心管,无菌流式管(BD),400滤网(BD) 染色方案: ① 细胞染色: 细胞消化计数,用DF12重悬,调整到1×106/ml浓度,分成三组2管; 37℃DF12洗涤,制备成单
技术资料暂无技术资料 索取技术资料









