pShuttle-CMV-C-Myc(腺病毒质粒)

产品简介:
pShuttle-CMV-C-Myc是碧云天自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达C端Myc tag(Myc标签)融合蛋白的重组腺病毒包装用的穿梭质粒。本穿梭质粒构建后，需要和预转染了pAdEasy-1质粒的BJ5183菌株(D8107)以及重组腺病毒包装细胞配合使用才能完成重组腺病毒的包装。

pShuttle-CMV-C-Myc含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达；在多克隆位点的3'端含有一个可以编码Myc标签的序列，因此可以表达出含有Myc标签的融合蛋白，可以方便地使用抗Myc的抗体来识别目的蛋白，有利于目的蛋白检测和分离纯化。

本质粒为卡那霉素抗性。

重组腺病毒(Recombinant adenoviruses)是一种常见的用于在培养细胞或动物体内表达外源基因的重要工具。重组腺病毒具有感染宿主细胞范围广、感染不依赖细胞分裂、高滴度及目的基因表达水平高等特性。最常用的腺病毒载体是人类血清5型腺病毒。改造后的人类血清5型腺病毒，删除了在病毒装配过程中起关键作用的E1基因和非必须的能表达逃避宿主免疫的E3基因，E1和E3基因的删除使得重组腺病毒不能自我复制，同时给外源基因的插入提供了空间，最长可插入7.5kb的外源基因。从而提高了重组腺病毒的的安全性和可操作性。再利用携带E1基因的AD-293、293A、HEK293等细胞作为包装细胞就可以完成重组腺病毒的包装。

pShuttle系列的穿梭质粒携带外源目的基因，经过Pme I线性化，随后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1(D8106)共转化到大肠杆菌BJ5183中，或者转化到已经预转化了pAdEasy-1质粒的BJ5183菌株(D8107)中同源重组。BJ5183菌株表达recET基因，具有很高的基因同源重组(homologous recombination)活性，使带有目的基因的穿梭质粒与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1通过末端反向重复序列同源重组，实现外源基因与腺病毒基因组的整合。将重组的携带外源基因的腺病毒质粒用Pac I线性化后转染到AD-293、293A、HEK293等重组腺病毒包装细胞中进行包装。从而制备获得高滴度、自我复制缺陷并且带有目的基因的重组腺病毒。

目的基因引入时不能含有Pme I及Pac I这两个酶切位点，如果含有该两个酶切位点的目的基因，需要对该位点进行突变方可进行基因操作。

pShuttle-CMV-C-Myc质粒的主要信息如下：

Feature Nucleotide	Position
left inverted terminal repeat	1–103
encapsidation signal (ES)	183–331
CMV promoter	341–933
multiple cloning site	940–994
Myc tag	999-1031
SV40 polyA	1051–1278
Ad5 right arm homology	1283–3537
Ad5 left arm homology	3585–4468
right inverted terminal repeat	4469–4571
pBR322 origin	4818–5485
kanamycin resistance ORF	6255–7046

pShuttle-CMV-C-Myc质粒的图谱如下：

pShuttle-CMV-C-Myc质粒的详细图谱见说明书

pShuttle-CMV-C-Myc中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pShuttle-CMV-C-Myc)包括：

Acc65 I	Afl II	Age I	Asc I	Asp718
Blp I	BsiC I	BsiW I	BstB I	Bsu36 I
Cla I	Eco72 I	EcoN I	Esp I	Fse I
Kpn I	Nru I	Pml I	Pvu I	Sfi I

pShuttle-CMV-C-Myc中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pShuttle-CMV-C-Myc once)包括：

BsrG I	T`GTAC,A	193	Hpa I	GTT|AAC	1161
SnaB I	TAC|GTA	679	PflM I	CCAN,NNN`NTGG	1939
Nhe I	G`CTAG,C	940	BstX I	CCAN,NNNN`NTGG	2378
Not I	GC`GGCC,GC	945	Bbs I	GAAGAC 8/12	3180
BamH I	G`GATC,C	952	Bbv II	GAAGAC 7/11	3181
Hind III	A`AGCT,T	958	Bst1107 I	GTA|TAC	3534
EcoR V	GAT|ATC	966	Xca I	GTA|TAC	3534
Sal I	G`TCGA,C	970	Pme I	GTTT|AAAC	3555
Mlu I	A`CGCG,T	976	EcoR I	G`AATT,C	3560
Bgl II	A`GATC,T	982	Avr II	C`CTAG,G	4102
PaeR7 I	C`TCGA,G	988	BspH I	T`CATG,A	5498
Xho I	C`TCGA,G	988	Psp1406 I	AA`CG,TT	5897
Xba I	T`CTAG,A	994	Rsr II	CG`GWC,CG	6903
Spe I	A`CTAG,T	1039	Dra III	CAC,NNN`GTG	7250
Sca I	AGT|ACT	1044	Xmn I	GAANN|NNTTC	7504

pShuttle-CMV-C-Myc质粒中推荐使用的测序引物序列如下：

forward primer (888-907): 5´GGTCTATATAAGCAGAGCTG3´

Reverse primer (1053-1075): 5´GTGGTATGGCTGATTATGATCAG 3´

pShuttle-CMV C-Myc的全序列信息:pShuttle-CMV C-Myc.txt。

保存条件：

-20℃保存。

注意事项：

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。