毕赤酵母KM71甘油菌

产品简介：
碧云天生产的毕赤酵母KM71甘油菌(Pichia Pastoris KM71 Yeast Glycerol Stock) 是取对数生长期的毕赤酵母KM71菌液，加入等体积30% (v/v)甘油制备而成。本甘油菌可以直接平板划线或小量、大量培养。

毕赤酵母具有真核细胞表达系统多方面的优势，包括较好的蛋白翻译后剪切、蛋白折叠以及翻译后修饰等[1]。与昆虫细胞表达系统和哺乳动物细胞表达系统相比，毕赤酵母表达系统快速、高效且经济，通常外源蛋白还具有较高的表达水平。与酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)相比，毕赤酵母的外源蛋白表达水平往往高10-100倍，并且能进行分泌蛋白的N-连接糖苷键修饰。但表达分泌蛋白进行糖基化修饰时的糖链长度是有差别的，毕赤酵母修饰的分泌蛋白的糖链长度通常是8-14个甘露糖残基(Mannose residue)，而酿酒酵母修饰的分泌蛋白的糖链长度通常是50-150个甘露糖残基，此外，毕赤酵母很少对分泌蛋白进行O-连接糖苷键的修饰[2]。

毕赤酵母表达系统中高水平重组蛋白表达的宿主是甲基营养型(即甲醇利用正常型)毕赤酵母(Methylotrophic yeast Pichia Pastoris )。在没有葡萄糖的情况下，毕赤酵母使用甲醇作为碳源。乙醇氧化酶(Alcohol oxidase, AOX1)启动子控制乙醇氧化酶的表达，是催化甲醇代谢的第一步。通常，甲醇诱导的细胞中总可溶性蛋白质的30%是乙醇氧化酶[3]。一些毕赤酵母表达载体利用强大的AOX1启动子，并使用甲醇诱导目的基因的高水平表达。如果更倾向于不依赖于甲醇诱导的表达，可以使用GAPDH (Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)基因的启动子实现组成型表达。诱导型和组成型表达构建物均整合到毕赤酵母基因组中，形成稳定的宿主，产生极高的蛋白质表达水平。AOX1基因突变丧失功能时，乙醇氧化酶活性缺失，产生Methanol utilization slow (Mut^s)基因型，也称Methanol utilization minus (Mut^-)基因型，而AOX1基因表达正常则被称为Methanol utilization plus (Mut⁺)基因型[4]。毕赤酵母KM71为Mut^s基因型。

毕赤酵母KM71的组氨醇脱氢酶基因(Histidinol dehydrogenase, his4)发生突变，阻止其合成组氨酸，所以KM71属于组氨酸缺陷型菌株(His^-)；如果表达载体上携带有组氨醇脱氢酶基因，就可补偿宿主菌的组氨酸缺陷，因此可以在不含组氨酸的培养基上筛选转化子，适用于筛选带有his4基因的表达载体。

毕赤酵母KM71基因型：arg4 his4 aox1::ARG4，表型：Mut^S，Arg⁺。

本甘油菌适宜的生长温度是28-30℃，温度超过32℃不利于蛋白的表达，并可能导致细胞的死亡。

本甘油菌可以在复合培养基如YPD中生长，或者在补充有组氨酸的基础培养基中生长。

保存条件：

-80℃保存，至少2年有效。须注意避免反复冻融。

注意事项：

使用本甘油菌时可以不必完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加酵母菌的活力会逐渐下降。在没有结冻的情况下，菌体会逐渐沉淀至管底，请务必注意适当混匀后使用。

为保证菌种纯正，避免其它细菌污染，尽量先划平板然后再挑单克隆菌落进行后续操作。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。