pCMV-Cre-mCherry

产品简介：
pCMV-Cre-mCherry是碧云天自行研发的含有CMV启动子的用于在哺乳动物细胞中表达带有mCherry (DsRed的突变体，一种非常明亮的红色荧光蛋白)标签的Cre Recombinase (Cre重组酶)的表达质粒。来自条件性基因敲除(conditional knockout) 小鼠等含有预先插入loxP位点的细胞在转染本质粒后，本质粒表达的Cre Recombinase可以导致两个loxP位点间的基因删除，从而实现条件性基因敲除(conditional gene knockout)。

Cre重组酶是来源于大肠杆菌噬菌体P1的一种类型I的拓朴异构酶(Type I topoisomerase)，也是一种酪氨酸重组酶(tyrosine recombinase)，它可识别34bp的loxP位点(两端为两个13bp的反向重复序列(inverted repeats)，中间是8bp的间隔区(图1)并催化loxP位点之间的DNA发生重组；重组产物根据loxP位点的位置和相对方向的不同而不同，两个含单loxP位点的DNA将发生融合：两个正向重复的loxP位点间的DNA将以环状形式被切割，而两个反向loxP位点间的DNA序列将被翻转(图2)。

图1. loxP位点序列图。Cre重组酶与两端13bp反向重复序列(小写字母)结合，中间是8bp不对称中心间隔区(大写字母)，箭头所示为Cre重组酶的酶切位点。

图2. Cre-loxP位点特异性重组示意图。

pCMV-Cre-mCherry质粒转染HeLa细胞后的荧光表达效果，可以看到mCherry标签的Cre重组酶主要分布在细胞核中(图3)。

图3. pCMV-Cre-mCherry质粒转染HeLa细胞后的表达效果图。左图为明场照片，中图为荧光照片，右图为叠加照片。

本质粒为卡那霉素抗性，转染细胞后，可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。

pCMV-Cre-mCherry质粒的主要信息如下：

Feature Nucleotide	Position
CMV promoter	1-602
T3 promoter and T3 primer binding site	620-639
Cre recombinase	677-1705
mCherry	1718-2428
multiple cloning site	2340-2488
T7 promoter and T7 primer binding site	2532-2553
SV40 polyA signal	2565-2948
f1 origin of ss-DNA replication	3086-3390
bla promoter	3415-3539
SV40 promoter	3559-3897
neomycin/kanamycin resistance ORF	3932-4723
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal	4724-5182
pUC origin	5311-5978

pCMV-Cre-mCherry质粒(6030bp)的图谱如下：

pCMV-Cre-mCherry的详细图谱见说明书

pCMV-Cre-mCherry中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-Cre-mCherry)包括：

AflII	AscI	BaeI	BlpI	BmgBI	BsiWI	BspEI
BspQI	BstXI	BstZ17I	EarI	EcoNI	FseI	NotI
PmeI	PmlI	PpuMI	PspXI	SacII	SapI	ScaI
SmaI	SrfI	SwaI	TspMI	XmaI

pCMV-Cre-mCherry中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-Cre-mCherry)包括：

AccI	GT`MK,AC	2454	Esp3I	CGTCTCN`NNNN,	1360
AclI	AA`CG,TT	1047	HindIII	A`AGCT,T	2430
AfeI	AGC|GCT	660	HpaI	GTT|AAC	2825
AhdI	GACNN,N`NNGTC	1911	MfeI	C`AATT,G	2812
AleI	CACNN|NNGTG	2360	MluI	A`CGCG,T	2948
ApaI	G,GGCC`C	2488	NdeI	CA`TA,TG	240
AsiSI	GCG,AT`CGC	1133	NheI	G`CTAG,C	597
BamHI	G`GATC,C	1032	NruI	TCG|CGA	891
BbsI	GAAGACNN`NNNN,	2153	PaeR7I	C`TCGA,G	2465
BbvCI	CC`TCA,GC	2256	PaqCI	CACCTGCNNNN`NNNN,	1286
BcgI	,NN`(N)10CGA(N)6TGC(N)10,NN`	1079	PflFI	GACN`N,NGTC	4178
BclI	T`GATC,A	2719	PflMI	CCAN,NNN`NTGG	2154
BglII	A`GATC,T	2460	PshAI	GACNN|NNGTC	1512
BmtI	G,CTAG`C	597	PspOMI	G`GGCC,C	2483
BsaI	GGTCTCN`NNNN,	5049	SacI	G,AGCT`C	651
BsgI	GTGCAG(N)14,NN`	2310	SalI	G`TCGA,C	2454
BsmBI	CGTCTCN`NNNN,	1360	SbfI	CC,TGCA`GG	2069
BsrGI	T`GTAC,A	2418	SfiI	GGCCN,NNN`NGGCC	3832
BssHII	G`CGCG,C	918	SgrAI	CR`CCGG,YG	2399
BtsI	GCAGTG,NN`	2899	SpeI	A`CTAG,T	2478
CspCI	,NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN`	380	Tth111I	GACN`N,NGTC	4178
DraIII	CAC,NNN`GTG	3175	XbaI	T`CTAG,A	2472
EagI	C`GGCC,G	3966	XcmI	CCANNNN,N`NNNNTGG	2403
Eco53I	GAG|CTC	653	XhoI	C`TCGA,G	2466
EcoRI	G`AATT,C	2442	XmnI	GAANN|NNTTC	885

如需对pCMV-Cre-mCherry质粒中插入片段Cre-mCherry进行测序时，推荐使用的正向测序引物T3和反向测序引物T7的序列如下：

T3 primer (620-639): 5' AATTAACCCTCACTAAAGGG 3'

T7 primer (2532-2553): 5' GTAATACGACTCACTATAGGGC 3'

pCMV-Cre-mCherry的全序列信息:D2607 pCMV-Cre-mCherry 全序列.txt

保存条件：

-20℃保存。

注意事项：

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。