SuperFOPFlash-CP (超灵敏快速降解型报告基因

产品简介：
SuperFOPFlash-CP (超灵敏快速降解型报告基因质粒)是SuperTOPFlash-CP (D2506)的阴性对照报告基因质粒。

SuperFOPFlash-CP是一种超灵敏快速降解型报告基因质粒(Super sensitive and destabilized reporter plasmid)，也被称为是快速响应萤光素酶报告基因质粒(Rapid response luciferase reporter plasmid)，是以碧云天的pGL6-TA-CP质粒(D2094)为模板，在其多克隆位点插入了8个重复的突变的TCF/LEF结合位点序列构建而成。与SuperFOPFlash (D2507)相比，SuperFOPFlash-CP中的萤光素酶增加了泛素化修饰识别序列CP。

SuperFOPFlash-CP质粒是用于在哺乳动物细胞中进行萤火虫萤光素酶(Firefly luciferase)报告基因检测的新一代质粒，该报告基因质粒和Promega公司的pGL3系列相比有了全面的改进。一方面对于luciferase的编码进行了改进，确保能更好地在哺乳动物细胞中进行表达；另一方面应用了快速降解型报告基因技术，在luciferase后增加了泛素-蛋白酶体系统识别和降解序列CL1和PEST，合并简称CP，从而可以促进luciferase-CP在细胞中的降解，降低萤光素酶的本底活性。同时整个质粒中可以被预测出的可能的转录因子结合位点全部进行了适当的突变处理，在保持原有功能不变的情况下，使各种转录因子在质粒上的非特异性结合降到最低。

本质粒中的CP包含针对哺乳动物细胞密码子优化的降解序列hCL1和hPEST。CL1源自酿酒酵母的16个氨基酸序列，可以引导蛋白质通过泛素-蛋白酶体系统(Ubiquitin-proteasome system)降解[1]；PEST源自小鼠鸟氨酸脱羧酶(Ornithine decarboxylase) C端的40个氨基酸序列(富含脯氨酸/proline (P)、谷氨酸/glutamic acid (E)、丝氨酸/serine (S)和苏氨酸/threonine (T)，PEST)，该序列可通过泛素-蛋白酶体系统促进蛋白质的降解[2]。与普通报告基因相比，快速降解型报告基因的背景更低，响应性更好，检测灵敏度更高，更适合监测动态变化过程，例如转录活性的节律变化等。

萤光素、萤光素酶、萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶也经常被称作荧光素、荧光素酶、萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶。

SuperFOPFlash-CP质粒的图谱如下：

SuperFOPFlash-CP质粒的主要信息如下：

Base pairs	5919
TCF binding sites(mutant)	20-135
Minimal TA promoter (pTA)	170-201
Luciferase reporter gene	234-1883
hCL1	1890-1937
hPEST	1941-2060
SV40 late poly(A) signal	2116-2237
SV40 early enhancer/promoter	2431-2788
Neomycin	2819-3613
Synthetic poly(A) signal	3638-3686
Reporter Vector primer 4 (RVprimer4) binding region	3753-3772
ColE1-derived plasmid replication origin	4010
Ampicillin	4801-5661
Synthetic poly(A) signal/transcriptional pause site	5766-5919
Reporter Vector primer 3 (RVprimer3) binding region	5868-5887

SuperFOPFlash-CP质粒的TCF binding sites (mutant)序列见说明书

SuperFOPFlash-CP质粒中没有的酶切位点包括：

Aat II	Asc I	Ase I	Bsa I	BsaA I	BsiW I	BspM II	BssH II
Eco72 I	EcoR I	EcoR V	Nde I	Nhe I	Nru I	PaeR7 I	PflM I
Pme I	Pml I	Psp1406 I	PspA I	Rsr II	Sma I	SnaB I	Spl I
Srf I	Tth111 I	Vsp I	Xcm I	Xho I

SuperFOPFlash-CP质粒中的单酶切位点包括：

Sfi I	GGCCN,NNN`NGGCC	8	EcoN I	CCTNN`N,NNAGG	3293
Bgl I	GCCN,NNN`NGGC	8	BstB I	T`CG,AA	3688
Acc65 I	G`GTAC,C	14	Sal I	G`TCGA,C	3702
Asp718	G`GTAC,C	14	ApaL I	G`TGCA,C	4266
Kpn I	G,GTAC`C	18	Not I	GC`GGCC,GC	4772
Sac I	G,AGCT`C	140	BstX I	CCAN,NNNN`NTGG	4796
Mlu I	A`CGCG,T	142	BstE II	G`GTNAC,C	4799
Bgl II	A`GATC,T	148	Ahd I	GACNN,N`NNGTC	4874
HinD III	A`AGCT,T	158	Bsu36 I	CC`TNA,GG	5230
BsrG I	T`GTAC,A	724	Pvu I	CG,AT`CG	5244
Gsu I	CTGGAG 21/19	1614	Sac II	CC,GC`GG	5268
Bpm I	CTGGAG 22/20	1614	Bst1107 I	GTA|TAC	5384
Mun I	C`AATT,G	2246	Spe I	A`CTAG,T	5703
BamH I	G`GATC,C	2339	BsmA I	GTCTC`/9	5716
Stu I	AGG|CCT	2772	BsmB I	CGTCTC 7/11	5716

SuperFOPFlash-CP质粒中推荐使用的测序引物序列如下：

RVprimer3 (5868-5887): CTA GCA AAA TAG GCT GTC CC

SuperFOPFlash-CP质粒的全序列信息:D2508 SuperFOPFlash-CP(超灵敏快速降解型报告基因质粒)-序列.txt

保存条件：

-20℃保存。

注意事项：

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。