pGLuc-Dura (报告基因质粒)

产品简介：
pGLuc-Dura (报告基因质粒)是碧云天自行研发的用于在哺乳动物细胞中进行分泌型、高稳定性、非ATP依赖的Gaussia-Dura Luciferase (Gluc-Dura)萤光素酶报告基因检测的新一代质粒。该报告基因质粒在pGL6 (D2102)的基础上进行了改造，使用了蛋白表达水平更高、萤光更稳定的突变型(mutant, Mut)的Gaussia-Dura Luciferase萤光素酶报告基因对原firefly luciferase进行了替换。同时该质粒也延续了pGL6的优势，即与Promega pGL3系列质粒相比，对整个质粒中所有可以被预测出的可能的转录因子结合位点全部进行了适当的突变处理，在保持原有功能不变的情况下，使各种转录因子在质粒上的非特异性结合降到最低。

Gaussia Luciferase是分离于夏威夷水域的一种大型海洋桡脚类(Copepod)动物(Gaussia princeps)的新型萤光素酶。Gaussia Luciferase为单条肽链的单体酶，其分子量较小(20kD)，且具有分泌性信号肽，可通过内质网分泌到细胞外。因此在使用Gaussia Luciferase的报告基因载体转染哺乳动物细胞进行表达时，无需裂解细胞，可直接使用细胞培养基上清进行萤光素酶活性的实时检测(当然也可以进行细胞裂解以分析细胞裂解中的萤光素酶活性)。

Gaussia Luciferase萤光素酶催化底物腔肠素的氧化反应并且发光(480nm)。与其他萤光素酶相比，使用Gaussia Luciferase作为报告基因有更多的优势：分泌型萤光素酶，可直接取上清检测，无须裂解细胞；发光强度高，是其它萤光素酶的1000倍；反应无须ATP，不受ATP影响；稳定性高，对温度、pH值等耐受性强。

与野生型Gaussia Luciferase相比，突变型Gaussia-Dura Luciferase在哺乳动物细胞中进行表达时，不仅保留了Gaussia Luciferase的优势和特点，还具有更高的蛋白表达水平和更好的萤光稳定性。

pGLuc-Dura (报告基因质粒)主要用于在其多克隆位点插入特定启动子、增强子等调控元件研究该调控序列的基因转录调控活性。本质粒为氨苄青霉素抗性。

萤光素、萤光素酶、萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶也经常被称作荧光素、荧光素酶、萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶。

pGLuc-Dura质粒的主要信息如下：

Feature Nucleotide	Position
Multiple cloning region	1-59
GLuc (MT) reporter gene	89-646
SV40 late poly (A) signal	677-898
SV40 early enhancer/promoter	946-1364
Synthetic neomycin phosphotransferase (Neor) coding region	1389-2183
Synthetic poly (A) signal	2208-2256
Reporter Vector primer 4 (RVprimer4) binding region	2323-2342
ColE1-derived plasmid replication origin	2580
Synthetic Beta-lactamase (Ampr) coding region	3371-4231
Synthetic poly (A) signal/transcriptional pause site	4336-4489
Reporter Vector primer 3 (RVprimer3) binding region	4438-4457

pGLuc-Dura质粒(4489bp)的图谱如下：

pGLuc-Dura的详细图谱见说明书

pGLuc-Dura中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pGLuc-Dura)包括：

AatII	AclI	AflII	AscI	AseI	AsiSI	BmgBI
BsaAI	BsaI	BsiWI	BspEI	BsrGI	BssHII	CspCI
DraIII	EcoRI	EcoRV	NdeI	PacI	PflFI	PflMI
PmeI	PmlI	RsrII	SbfI	SmaI	SnaBI	SrfI
SwaI	TspMI	Tth111I	XcmI	XmaI	ZraI

pGLuc-Dura中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pGLuc-Dura)包括：

Acc65I	G`GTAC,C	14	Eco53kI	GAG|CTC	34
AgeI	A`CCGG,T	2193	EcoNI	CCTNN`N,NNAGG	1863
AleI	CACNN|NNGTG	3364	Esp3I	CGTCTCN`NNNN,	4286
ApaI	G,GGCC`C	1459	FspI	TGC|GCA	947
ApoI	R`AATT,Y	752	HindIII	A`AGCT,T	55
AvaI	C`YCGR,G	26	HpaI	GTT|AAC	807
BaeI	,(N)5`(N)10ACNNNNGTAYC(N)7,(N)5`	1589	KpnI	G,GTAC`C	19
BamHI	G`GATC,C	909	MfeI	C`AATT,G	816
BbvCI	CC`TCA,GC	2074	MluI	A`CGCG,T	39
BciVI	GTATCC(N)5,N`	2724	NheI	G`CTAG,C	21
BcoDI	GTCTCN`NNNN,	4286	NotI	GC`GGCC,GC	3342
BglI	GCCN,NNN`NGGC	9	NruI	TCG|CGA	194
BglII	A`GATC,T	45	PaeR7I	C`TCGA,G	26
BmtI	G,CTAG`C	20	PciI	A`CATG,T	2522
BpmI	CTGGAG(N)14,NN`	267	PsiI	TTA|TAA	787
BsaXI	,NNN`(N)9AC(N)5CTCC(N)7,NNN`	81	PspOMI	G`GGCC,C	1459
BsmAI	GTCTCN`NNNN,	4286	PspXI	VC`TCGA,GB	26
BsmBI	CGTCTCN`NNNN,	4286	PvuII	CAG|CTG	1019
BsoBI	C`YCGR,G	26	SacI	G,AGCT`C	37
BspHI	T`CATG,A	3242	SfiI	GGCCN,NNN`NGGCC	5
BssSI	C`ACGA,G	2695	SgrAI	CR`CCGG,YG	1605
BstBI	TT`CG,AA	2258	SpeI	A`CTAG,T	4273
BstEII	G`GTNAC,C	3369	StuI	AGG|CCT	1342
BstXI	CCAN,NNNN`NTGG	3362	XhoI	C`TCGA,G	27
BstZ17I	GTA|TAC	3954	XmnI	GAANN|NNTTC	350
Bsu36I	CC`TNA,GG	3800

pGLuc-Dura质粒可使用的测序引物序列如下：

RVprimer3 (4438-4457): CTA GCA AAA TAG GCT GTC CC

pGLuc-Dura的全序列信息: D2100 pGLuc-Dura (报告基因质粒).txt。

保存条件：

-20℃保存。

注意事项：

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。