pCMV-MCS-P2A-mCherry-HA-Hyg

产品简介：
pCMV-MCS-P2A-mCherry-HA-Hyg是碧云天研发的用于在哺乳动物细胞中同时表达目的蛋白、红色荧光蛋白mCherry和潮霉素B (Hygromycin B)抗性基因的表达质粒。

本质粒含有的CMV启动子可以高效启动目的基因的表达，同时可以通过P2A共表达红色荧光蛋白mCherry，便于通过mCherry的荧光特性监测目的蛋白的表达情况。本质粒的表达效果可以参考图1。

图1. 碧云天pCMV-MCS-P2A-mCherry-HA-Hyg质粒使用Lipo8000™转染试剂(C0533)转染293T细胞后的表达效果图。左侧为明场照片，右侧为荧光照片。本图仅供参考，实际拍摄效果会因具体实验条件的不同而有所不同。

本质粒在多克隆位点和mCherry的编码序列之间含有P2A肽序列。P2A是一个可以被理解为含有19个氨基酸残基(ATNFSLLKQAGDVEENPGP)的“自剪切”小肽。但实际的过程并不是发生自剪切，而是使核糖体跳过P2A等2A元件C端的甘氨酸和脯氨酸肽键的合成而发挥作用，最终导致2A序列末端和下游产物分离。上游目的基因表达蛋白的C端将会添加一些额外的P2A残基(GSGATNFSLLKQAGDVEENPG)，而下游蛋白的N端将会有额外的脯氨酸。在P2A肽的N端加入GSG序列，可提高剪切效率 [1,2]。

本质粒为氨苄青霉素(Ampicillin)和潮霉素B (Hygromycin B)抗性。可利用其氨苄青霉素抗性，转化大肠杆菌后筛选阳性克隆。转染哺乳动物细胞后，可使用Hygromycin B (ST1389)筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。

pCMV-MCS-P2A-mCherry-HA-Hyg质粒的主要信息如下：

Feature Nucleotide	Position
AmpR	63-923
AmpR promoter	924-1016
CMV enhancer	1101-1404
CMV promoter	1405-1608
T3 promoter	1654-1672
P2A	1769-1834
mCherry	1835-2542
HA	2549-2575
T7 promoter	2630-2648
SV40 poly(A) signal	2922-3043
f1 ori	3050-3505
AmpR promoter	3532-3636
SV40 promoter	3638-3995
SV40 ori	3846-3981
HygR	4030-5055
HSV TK poly(A) signal	5287-5334
ori	5663-6251

pCMV-MCS-P2A-mCherry-HA-Hyg质粒(6539bp)的图谱如下：

pCMV-MCS-P2A-mCherry-HA-Hyg的多克隆位点的详细图谱如下

pCMV-MCS-P2A-mCherry-HA-Hyg中没有的酶切位点包括：

AarI	AbsI	AcvI	AfeI	AgeI	AhlI	Aor51HI
AscI	AsiGI	BaeI	BbrPI	BcuI	BlpI	Bpu1102I
BsePI	BshTI	BsiWI	Bsp68I	Bsp1720I	BspQI	BssHII
BssNAI	Bst1107I	BstENI	BstZ17I	BtuMI	CelII	CspAI
Eco47III	Eco72I	EcoNI	FseI	FspAI	I-CeuI	I-PpoI
I-SceI	LguI	MauBI	MreI	MssI	NruI	PalAI
PauI	PciSI	Pfl23II	PI-PspI	PI-SceI	PinAI	PmaCI
PmeI	PmlI	PpuMI	Psp5II	PspCI	PspLI	PspPPI
PspXI	PsrI	RigI	SanDI	SapI	SgrDI	SgsI
SmiI	SpeI	SwaI	XagI

pCMV-MCS-P2A-mCherry-HA-Hyg中的单酶切位点包括：

AccI	GT`MK,AC	1752	MluI	A`CGCG,T	3044
AflII	C,TTAA,G	2574	MscI	TGG|CCA	1865
ApaI	G,GGCC`C	2583	NdeI	CA`TA,TG	1274
AsiSI	GCG,AT`CGC	4394	NheI	G`CTAG,C	1631
BamHI	G`GATC,C	1721	NotI	GC`GGCC,GC	1702
BbsI	GAAGACNN`NNNN,	2270	PaeR7I	C`TCGA,G	1763
BbvCI	CC`TCA,GC	2373	PciI	A`CATG,T	6307
BcgI	,NN`(N)10CGANNNNNNTGC(N)10,NN`	641	PflFI	GACN`N,NGTC	4534
BclI	T`GATC,A	2815	PflMI	CCAN,NNN`NTGG	2274
BglII	A`GATC,T	1757	PshAI	GACNN|NNGTC	4057
BmgBI	CAC|GTC	1813	PspOMI	G`GGCC,C	2579
BmtI	G,CTAG`C	1635	RsrII	CG`GWC,CG	4438
Bpu10I	CC`TNA,GC	2373	SacI	G,AGCT`C	1689
BsgI	GTGCAGNNNNNNNNNNNNNN,NN`	2429	SacII	CC,GC`GG	1696
BsmBI	CGTCTCN`NNNN,	1803	SalI	G`TCGA,C	1751
BspDI	AT`CG,AT	3998	SbfI	CC,TGCA`GG	2190
BsrGI	T`GTAC,A	2535	SfiI	GGCCN,NNN`NGGCC	3933
BstBI	TT`CG,AA	5071	SgrAI	CR`CCGG,YG	2516
BstXI	CCAN,NNNN`NTGG	1697	SmaI	CCC|GGG	1716
ClaI	AT`CG,AT	3998	SnaBI	TAC|GTA	1380
CspCI	,NN`(N)11CAANNNNNGTGG(N)10,NN`	1416	SrfI	GCCC|GGGC	1716
EarI	CTCTTCN`NNN,	931	TspMI	C`CCGG,G	1714
Eco53kI	GAG|CTC	1687	Tth111I	GACN`N,NGTC	4534
EcoRI	G`AATT,C	1739	XbaI	T`CTAG,A	2543
EcoRV	GAT|ATC	1747	XcmI	CCANNNN,N`NNNNTGG	2521
Esp3I	CGTCTCN`NNNN,	1803	XhoI	C`TCGA,G	1763
HindIII	A`AGCT,T	1727	XmaI	C`CCGG,G	1714
HpaI	GTT|AAC	2921	XmnI	GAANN|NNTTC	735
MfeI	C`AATT,G	2908

pCMV-MCS-P2A-mCherry-HA-Hyg质粒中对插入片段进行测序时，推荐使用的正向测序引物T3和反向测序引物mCherry primer的序列如下：

T3 primer (1654-1672): 5' AATTAACCCTCACTAAAGG 3'

mCherry primer (1837-1853): 5' CCTCGCCCTTGCTCACC 3'

pCMV-MCS-P2A-mCherry-HA-Hyg的全序列信息：D2822 pCMV-MCS-P2A-mCherry-HA-Hyg 全序列.txt

保存条件：

-20℃保存。

注意事项：

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。