pCMV-N-Myc-MCS-P2A-EGFP-Neo

产品简介：
pCMV-N-Myc-MCS-P2A-EGFP-Neo是碧云天研发的用于在哺乳动物细胞中同时表达N端带有Myc标签(Myc tag, EQKLISEEDL)的目的蛋白、增强绿色荧光蛋白EGFP和新霉素(Neomycin)抗性基因的表达质粒。

本质粒含有CMV启动子可以高效启动目的基因的表达；可以方便地使用抗Myc标签的抗体(AF5054/AF0033/AM933/AM926)来检测目的蛋白；同时可以通过P2A共表达增强绿色荧光蛋白EGFP，便于通过EGFP的荧光特性监测目的蛋白的表达情况。本质粒的表达效果可以参考图1。

图1. 碧云天pCMV-N-Myc-MCS-P2A-EGFP-Neo质粒使用Lipo8000™转染试剂(C0533)转染293T细胞后的表达效果图。左侧为明场照片，右侧为荧光照片。本图仅供参考，实际拍摄效果会因具体实验条件的不同而有所不同。

本质粒在多克隆位点和EGFP的编码序列之间含有P2A肽序列。P2A是一个可以被理解为含有19个氨基酸残基(ATNFSLLKQAGDVEENPGP)的“自剪切”小肽。但实际的过程并不是发生自剪切，而是使核糖体跳过P2A等2A元件C端的甘氨酸和脯氨酸肽键的合成而发挥作用，最终导致2A序列末端和下游产物分离。上游目的基因表达蛋白的C端将会添加一些额外的P2A残基(GSGATNFSLLKQAGDVEENPG)，而下游蛋白的N端将会有额外的脯氨酸。在P2A肽的N端加入GSG序列，可提高剪切效率 [1,2]。

本质粒为卡那霉素(Kanamycin)和新霉素(Neomycin)抗性。可利用其卡那霉素抗性，转化大肠杆菌后筛选阳性克隆。转染哺乳动物细胞后，可使用G-418 (ST081/ST082)筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。

pCMV-N-Myc-MCS-P2A-EGFP-Neo质粒的主要信息如下：

Feature Nucleotide	Position
CMV enhancer	67-370
CMV promoter	371-574
T3 promoter	620-638
Myc	679-708
P2A	778-843
EGFP	844-1563
T7 promoter	1615-1633
SV40 poly(A) signal	1907-2028
f1 ori	2035-2490
AmpR promoter	2517-2621
SV40 promoter	2623-2980
SV40 ori	2831-2966
NeoR/KanR	3015-3809
HSV TK poly(A) signal	4041-4088
ori	4417-5005

pCMV-N-Myc-MCS-P2A-EGFP-Neo质粒(5113bp)的图谱如下：

pCMV-N-Myc-MCS-P2A-EGFP-Neo的多克隆位点的详细图谱如下

pCMV-N-Myc-MCS-P2A-EGFP-Neo中没有的酶切位点包括：

AarI	AbsI	AccIII	Acc113I	AccB7I	AclI	AcvI
AfeI	AflII	AgeI	AhdI	Aor13HI	Aor51HI	AscI
AsiGI	AsiSI	Asp700I	AspEI	BaeI	BbrPI	BbsI
BbvCI	BfrI	BlpI	BmcAI	BmeRI	BoxI	BpiI
Bpu1102I	BpuAI	BseAI	BsePI	BshTI	BsiWI	Bsp13I
Bsp68I	Bsp1720I	BspEI	BspQI	BspTI	BssHII	BssNAI
Bst98I	Bst1107I	BstAFI	BstEII	BstENI	BstPI	BstPAI
BstV2I	BstZ17I	BtuMI	CelII	CspAI	DriI	Eam1105I
Eco47III	Eco72I	Eco91I	EcoNI	EcoO65I	FseI	FspAI
I-CeuI	I-PpoI	I-SceI	Kpn2I	LguI	MauBI	MreI
MroI	MroXI	MspCI	MssI	NruI	PalAI	PauI
PciSI	PdmI	Pfl23II	PflMI	PI-PspI	PI-SceI	PinAI
PmaCI	PmeI	PmlI	PpuMI	PshAI	Psp5II	Psp1406I
PspCI	PspEI	PspLI	PspPPI	PspXI	PsrI	RgaI
RigI	SanDI	SapI	SbfI	ScaI	SdaI	SfaAI
SgfI	SgrAI	SgrDI	SgsI	SmiI	Sse8387I	SwaI
Van91I	Vha464I	XagI	XcmI	XmnI	ZrmI

pCMV-N-Myc-MCS-P2A-EGFP-Neo中的单酶切位点包括：

AccI	GT`MK,AC	749	MluI	A`CGCG,T	2029
ApaI	G,GGCC`C	1568	MscI	TGG|CCA	3225
ApaLI	G`TGCA,C	4747	NarI	GG`CG,CC	3143
BamHI	G`GATC,C	718	NdeI	CA`TA,TG	240
BcgI	,NN`(N)10CGA(N)6TGC(N)10,NN`	934	NheI	G`CTAG,C	597
BclI	T`GATC,A	1800	NotI	GC`GGCC,GC	668
BglII	A`GATC,T	754	PaeR7I	C`TCGA,G	760
BmgBI	CAC|GTC	822	PciI	A`CATG,T	5061
BmtI	G,CTAG`C	601	PflFI	GACN`N,NGTC	3261
BsaI	GGTCTCN`NNNN,	4132	PluTI	G,GCGC`C	3146
BsaXI	,NNN`(N)9ACNNNNNCTCC(N)7,NNN`	2193	PspOMI	G`GGCC,C	1564
BsmBI	CGTCTCN`NNNN,	812	PstI	C,TGCA`G	734
BspDI	AT`CG,AT	2983	PvuI	CG,AT`CG	1646
BsrDI	GCAATG,NN`	3376	RsrII	CG`GWC,CG	3659
BsrGI	T`GTAC,A	1553	SacI	G,AGCT`C	655
BstBI	TT`CG,AA	3825	SacII	CC,GC`GG	662
BstXI	CCAN,NNNN`NTGG	663	SalI	G`TCGA,C	748
ClaI	AT`CG,AT	2983	SfiI	GGCCN,NNN`NGGCC	2918
CspCI	,NN`(N)11CAANNNNNGTGG(N)10,NN`	382	SfoI	GGC|GCC	3144
DraIII	CAC,NNN`GTG	2259	SmaI	CCC|GGG	713
DarI	CTCTTCN`NNN,	692	SnaBI	TAC|GTA	346
Eco53kI	GAG|CTC	653	SpeI	A`CTAG,T	772
EcoRI	G`AATT,C	736	SrfI	GCCC|GGGC	713
EcoRV	GAT|ATC	744	StuI	AGG|CCT	2964
Esp3I	CGTCTCN`NNNN,	812	TspMI	C`CCGG,G	711
HindIII	A`AGCT,T	724	Tth111I	GACN`N,NGTC	3261
HpaI	GTT|AAC	1906	XbaI	T`CTAG,A	766
KasI	G`GCGC,C	3142	XhoI	C`TCGA,G	760
MfeI	C`AATT,G	1893	XmaI	C`CCGG,G	711

pCMV-N-Myc-MCS-P2A-EGFP-Neo质粒中对于插入片段进行测序时，推荐使用的正向测序引物T3和反向测序引物EGFP primer的序列如下：

T3 primer (620-639): 5' AATTAACCCTCACTAAAGGG 3'

EGFP primer (846-862): 5' CCTCGCCCTTGCTCACC 3'

pCMV-N-Myc-MCS-P2A-EGFP-Neo的全序列信息：D2757 pCMV-N-Myc-MCS-P2A-EGFP-Neo 全序列.txt

保存条件：

-20℃保存。

注意事项：

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。