- ￥888 - 1169
- 碧云天（beyotime）
- 国产
- D2707
- 2025年07月14日
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上海经科化学科技有限公司
- 规格：
1μg/100μg
| 规格： | 1μg | 产品价格： | ￥888.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 100μg | 产品价格： | ￥1169.0 |
产品简介：
pCMV-N-EGFP是碧云天自行研发的哺乳动物细胞表达质粒，用于表达N端含EGFP(Enhanced Green Fluorescent Protein, 增强绿色荧光蛋白)标签的融合蛋白。该质粒含有CMV启动子，可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达。在多克隆位点的前面有一个EGFP的完整编码序列，因此在多克隆位点根据阅读框插入目的基因就可以表达N端含有EGFP标签的融合蛋白。利用EGFP的荧光特性可以比较容易地观察融合蛋白的表达水平和细胞内定位，也可以利用EGFP抗体来检测或免疫沉淀融合蛋白。该质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后，可以使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
pCMV-N-EGFP质粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| CMV promoter | 1-602 |
| T3 promoter and T3 primer binding site | 620-639 |
| EGFP | 677-1393 |
| Multiple cloning site | 1394-1483 |
| T7 promoter and T7 primer binding site | 1503-1524 |
| SV40 polyA signal | 1536-1919 |
| f1 origin of ss-DNA replication | 2057-2363 |
| bla promoter | 2388-2512 |
| SV40 promoter | 2532-2870 |
| Neomycin/kanamycin resistance ORF | 205-3696 |
| HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal | 3697-4155 |
| pUC origin | 4284-4951 |
pCMV-N-EGFP质粒(5003bp)的图谱如下：
pCMV-N-EGFP质粒的详细图谱见说明书
pCMV-N-EGFP中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-EGFP)包括：
| AclI | AflII | AhdI | AscI | AsiSI | BaeI | BbsI |
| BbvCI | BlpI | BmgBI | BsiWI | BsmBI | BspEI | BspQI |
| BssHII | BstEII | BstXI | BstZ17I | EarI | EcoNI | FseI |
| NotI | NruI | PflMI | PmeI | PmlI | PpuMI | PshAI |
| PspXI | SacII | SapI | SbfI | ScaI | SgrAI | SmaI |
| SwaI | TspMI | XcmI | XmaI | XmnI |
pCMV-Blank中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-Blank once)包括：
| NdeI | CA`TA,TG | 240 | ApaI | G,GGCC`C | 1454 | |
| SnaBI | TAC|GTA | 346 | PvuI | CG,AT`CG | 1534 | |
| CspCI | ,NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN` | 380 | BclI | T`GATC,A | 1690 | |
| NheI | G`CTAG,C | 597 | MfeI | C`AATT,G | 1783 | |
| BmtI | G,CTAG`C | 597 | HpaI | GTT|AAC | 1796 | |
| Eco53kI | GAG|CTC | 653 | MluI | A`CGCG,T | 1919 | |
| SacI | G,AGCT`C | 651 | BsaXI | ,NNN`(N)9AC(N)5CTCC(N)7,NNN` | 2080 | |
| AfeI | AGC|GCT | 660 | DraIII | CAC,NNN`GTG | 2146 | |
| AgeI | A`CCGG,T | 664 | SfiI | GGCCN,NNN`NGGCC | 2805 | |
| BcgI | ,NN`(N)10CGA(N)6TGC(N)10,NN` | 765 | StuI | AGG|CCT | 2854 | |
| BsrGI | T`GTAC,A | 1386 | ClaI | AT`CG,AT | 2873 | |
| BamHI | G`GATC,C | 1394 | BspDI | AT`CG,AT | 2873 | |
| HindIII | A`AGCT,T | 1400 | EagI | C`GGCC,G | 2939 | |
| PstI | C,TGCA`G | 1406 | KasI | G`GCGC,C | 3032 | |
| EcoRI | G`AATT,C | 1412 | NarI | GG`CG,CC | 3033 | |
| EcoRV | GAT|ATC | 1420 | SfoI | GGC|GCC | 3034 | |
| SalI | G`TCGA,C | 1424 | PluTI | G,GCGC`C | 3032 | |
| AccI | GT`MK,AC | 1425 | MscI | TGG|CCA | 3115 | |
| BglII | A`GATC,T | 1430 | PflFI | GACN`N,NGTC | 3151 | |
| BsoBI | C`YCGR,G | 1436 | Tth111I | GACN`N,NGTC | 3151 | |
| PaeR7I | C`TCGA,G | 1436 | BsrDI | GCAATG,NN` | 3264 | |
| AvaI | C`YCGR,G | 1436 | RsrII | CG`GWC,CG | 3549 | |
| XhoI | C`TCGA,G | 1436 | BstBI | TT`CG,AA | 3715 | |
| XbaI | T`CTAG,A | 1442 | BsaI | GGTCTCN`NNNN, | 4022 | |
| SpeI | A`CTAG,T | 1448 | ApaLI | G`TGCA,C | 4637 | |
| PspOMI | G`GGCC,C | 1454 | PciI | A`CATG,T | 4951 |
pCMV-N-EGFP质粒中推荐使用的测序引物序列如下：
N-EGFP primer (1284-1303): 5'-GCACCCAGTCCGCCCTGAGC-3'
T7 primer (1503-1524): 5'-GTAATACGACTCACTATAGGGC-3'
pCMV-N-EGFP的全序列信息：D2707 pCMV-N-EGFP-seq.txt
pCMV-N-EGFP质粒转染细胞后的表达效果请参考图1。
图1. pCMV-N-EGFP质粒转染细胞后的表达效果图。左侧为明场照片，右侧为荧光照片。
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-20℃保存。
注意事项：
本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验一、 GFP背景概述 绿色荧光蛋白（green fluorescent protein, GFP）最早由Osamu Shimomura于1962年在水母（Aequorea victoria）（图2a）中发现。这种蛋白质在蓝色波长范围的光照激发下发出绿色荧光，其发光过程需要冷光蛋白质Aequorin的帮助，而且，这个冷光蛋白质可与钙离子（Ca2+）相互作用（图3）。在Aequorea victoria中发现的野生型绿色荧光蛋白的分子量较小，仅为27~30kDa，而编码GFP的基因序列也很短
1. 应用说明 AcGFP1是从水母（Aequorea coerulescens）中分离出来的荧光蛋白，是EGFP的优良的代替品。AcGFP1的特性与EGFP相似，AcGFP1的激发波峰为475nm，发射波峰为505nm。此外，AcGFP1与EGFP在核酸水平上有94%的同源性。AcGFP1的特点是具有进行了人类密码子优化的开放阅读框。这不仅提高了AcGFP1 mRNA的转化
dmdfe 本人将GFP基因后面加了一段大约110bp的序列，插入PET28A的BamH1和Hind3位点，最后在BL21中表达。 经SDS-PAGE验证表明： 目的蛋白 大量存在菌体裂解后沉淀即包涵体中，但是该沉淀无色。 少量存在于上清中，上清显微弱的绿色。 看文献大量报道GFP融合蛋白几乎都形成可溶性表达，目的蛋白在上清中，并且诱导条件没有太大要求。 想请教一下各位做过GFP原核表达的经验
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