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- 供应商：
上海经科化学科技有限公司
- 规格：
1μg/100μg
| 规格： | 1μg | 产品价格： | ￥888.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 100μg | 产品价格： | ￥1169.0 |
产品简介：
pET-Dual-N-His-TEV是一种用于在大肠杆菌中高效共表达两种目的蛋白的质粒。本质粒表达的两种目的蛋白中，其中一种可以带上His标签并且His标签后有TEV蛋白酶的酶切位点。本质粒包含两个多克隆位点(MCS)，每个多克隆位点前都有一个T7启动子/lac操作子和一个核糖体结合位点(Ribosome binding site, rbs)，因此都可以在异丙基硫代半乳糖苷 (IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白的表达。本质粒为氨苄青霉素抗性。
在共表达两个目的蛋白的复合物时，通常宜把较难表达的基因克隆到第一个多克隆位点，宜把较易表达的基因克隆到第二个多克隆位点。这样通过镍柱纯化，可分离纯化获得带有His标签的蛋白复合物。本质粒的N端His标签与第一个多克隆位点之间有TEV蛋白酶识别的七肽序列ENLYFQG，对应的核酸序列为GAGAACCTGTACTTCCAAGGG，因此可在目的蛋白复合物纯化后可用TEV蛋白酶切除克隆在第一个多克隆位点目的蛋白的N端的His标签。TEV蛋白酶酶切发生在七肽序列的Q和G之间，因此在酶切去除His标签的时候第一个多克隆位点目的蛋白的N端会留下一个额外的氨基酸残基G。当然，本质粒也可以只在第一个多克隆位点插入目的基因，这样就会仅表达一个含有N端His标签和TEV识别位点的目的蛋白。
pET-Dual-N-His-TEV质粒(5438bp)的图谱如下：
pET-Dual-N-His-TEV质粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| lac operator-1 | 3-27 |
| His-taq | 74-103 |
| TEV site sequence | 104-124 |
| Multiple cloning sites-1 (BamHI-NotI) | 125-168 |
| T7 promoter-2 | 232-250 |
| lac operator-2 | 251-275 |
| Multiple cloing sites-2 (NdeI-XhoI) | 316-372 |
| S Tag coding sequence | 384-428 |
| T7 terminator | 480-527 |
| f1 origin | 564-1019 |
| AmpR coding sequence | 1134-1994 |
| pBR322 origin | 2168-2756 |
| lacI coding sequence | 3949-5031 |
| T7 promoter-1 | 5422-5438 |
pET-Dual-N-His-TEV的详细图谱见说明书
pET-Dual-N-His-TEV中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pET-Dual-N-His-TEV)包括：
| AgeI | AleI | BbvCI | BmgBI | BmtI | BseRI | BsiWI |
| BsmI | BstBI | Bsu36I | CspCI | MscI | NcoI | NheI |
| NruI | PaqCI | PmeI | PmlI | PshAI | RsrII | SacII |
| SexAI | SfiI | SmaI | SnaBI | SpeI | SrfI | StuI |
| SwaI | TspMI | XmaI |
pET-Dual-N-His-TEV中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pET-Dual-N-His-TEV)包括：
| AatII | G,ACGT`C | 364 | EcoRV | GAT|ATC | 337 |
| Acc65I | G`GTAC,C | 366 | FseI | GG,CCGG`CC | 342 |
| AflII | C`TTAA,G | 181 | FspI | TGG|CCA | 1429 |
| AhdI | GACNN,N`NNGTC | 1206 | HindII | A`AGCT,T | 162 |
| AlwNI | CAG,NNN`CTG | 2400 | HpaI | GTT|AAC | 4174 |
| ApaI | G,GGCC`C | 4469 | KpnI | G,GTAC`C | 366 |
| AscI | GG`CGCG,CC | 144 | MfeI | C`TCGA,G | 329 |
| AsiSI | GCG,AT`CGC | 353 | MluI | A`CGCG,T | 4676 |
| AvaI | C`YCGR,G | 376 | NdeI | CA`TA,TG | 316 |
| AvrII | C`CTAG,G | 451 | NotI | GC`GGCC,GC | 169 |
| BaeI | ,(N)5`(N)10ACNNNNGTAYC(N)7,(N)5` | 345 | NsiI | A,TGCA`T | 71 |
| BamHI | G`GATC,C | 125 | PacI | TTA,AT`TAA | 445 |
| BclI | T`GATC,A | 4662 | PaeR7I | C`TCGA,G | 372 |
| BfuAI | ACCTGCNNNN`NNNN, | 143 | PciI | A`CATG,T | 2812 |
| BglI | GCCN,NNN`NGGC | 1324 | PflFI | GACN`N,NGTC | 3070 |
| BlpI | GC`TNA,GC | 469 | PsiI | TTA|TAA | 922 |
| Bpu10I | CC`TNA,GC | 3707 | PspOMI | G`GGCC,C | 4469 |
| BsaI | GGTCTCN`NNNN, | 1268 | PspXI | VC`TCGA,GB | 372 |
| BsoBI | C`YCGR,G | 372 | PstI | C,TGCA`G | 150 |
| BspDI | AT`CG,AT | 5401 | SacI | G,AGCT`C | 137 |
| BspMI | ACCTGCNNNN`NNNN, | 143 | SalI | G`TCGA,C | 156 |
| BspQI | GCTCTTCN`NNN, | 2929 | SapI | GCTCTTCN`NNN, | 2929 |
| BsrGI | T`GTAC,A | 208 | SbfI | CC,TGCA`GG | 150 |
| BstAPI | GCAN,NNN`NTGC | 4997 | ScaI | AGT|ACT | 1687 |
| BstEII | G`GTNAC,C | 4494 | SgrAI | CR`CCGG,YG | 5357 |
| BstZ17I | GTA|TAC | 3045 | SphI | G,CATG`C | 5205 |
| BtgI | C`CRYG,G | 5239 | SspI | AAT|ATT | 1002 |
| ClaI | AT`CG,AT | 5401 | Tth111I | GACN`N,NGTC | 3070 |
| DraIII | CAC,NNN`GTG | 794 | XbaI | T`CTAG,A | 30 |
| Eco53kI | GAG|CTC | 139 | XhoI | C`TCGA,G | 372 |
| EcoNI | CCTNN`N,NNAGG | 5144 | ZraI | GAC|GTC | 362 |
| EcoRI | G`AATT,C | 131 |
pET-Dual-N-His-TEV质粒可使用的测序引物序列如下：
MCS1-N Primer (5391-5409): 5'-AGGATCGAGATCGATCTCG-3'
MCS1-C Primer (226-207): 5'-GATTATGCGGCCGTGTACAA-3'
MCS2-N Primer (207-226): 5'-TTGTACACGGCCGCATAATC-3'
pET-Dual-N-His-TEV的全序列信息：D2934 pET-Dual-N-His-TEV.txt。
保存条件：
-20℃保存。
注意事项：
本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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