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999
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亦高生物
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L4754-5mg

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文献和实验的酿酒酵母的分泌信号—α交配因子(α-factor)引导序列已经成功地引导了几种外源蛋白的分泌。分泌表达载体主要有:pPIC9,pPIC9K,pHIL-S1,pPICZα A,pYAM75P等。胞内表达载体主要有:pHIL-D2,pA0815,pPIC3K,pPICZ,pHWO10,pGAPZ, pGAPZa(Invitrogen),pPIC3.5K等。工程菌株Y11430,MG1003,GS115 (AOX1),KM71,SMD1168。毕赤酵母宿主菌常用的有GS115和KM71两种,都具有
片段。 3.目的片段的克隆 纯化的片段连接到克隆载体pGEM-Tvector,转化导入宿主菌E.coliDH5α,通过蓝白斑筛选,PCR扩增鉴定后测序,获得的含所需要的目的片段的质粒。 (1)pGEM®-TEasy载体系统 I.描述 pGEM®-TEasy载体系统可用于PCR产物的克隆。这种载体是通过EcoRⅤ酶切pGEM®-5Zf(+)和pGEM®-TEasy载体,并在3’末端加入胸腺嘧啶构建的。插入位点3’-T突出端可提高PCR产物的连接效率,因为3’-T突出端可以防止载体的自身环化,并且为
1.毕赤酵母表达常用溶液及缓冲液的配制1.1 各种母液的配制10*YNB:(含有硫酸铵、无氨基酸的13.4%酵母基础氮源培养基) 4℃保存。34g酵母基础氮源培养基(无硫酸铵)+100g硫酸铵,溶于1000ml水中,过滤除菌。500*B:(0.02%生物素 Biotin) 4℃保存 保存期为1年。20mg的生物素溶于100ml水中,过滤除菌。100*H:(0.4%Histidine 组氨酸) 4℃保存 保存期为1年。400mg的L-组氨酸溶于100ml水中,(加热至50℃以促进溶解),过滤
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