SigmaE8751-1g,溴化乙锭|EB

RNA琼脂糖凝胶电泳实验操作步骤与注意事项

的泳动率才与分子量的对数呈线性关系。因此要测定RNA分子量时，一定要用变性凝胶。在需快速检测所提总RNA样品完整性时，配制普通的1%琼脂糖凝胶即可。 三、实验材料、器具及药品 蘑菇的总RNA溶液。 电泳仪，电泳槽，电子天平，移液器，枪头，微波炉，紫外透射检测仪等。 琼脂糖，1XTAE电泳缓冲液，0.5μg/ml溴化乙锭(EB)10X载样缓冲液。 四、实验步骤 (1)用1×TAE电泳缓冲液制作琼脂糖凝胶，加1×TAE

质粒 DNA 琼脂糖凝胶电泳定量及定量检测

。 DNA 分子的迁移速度与相对分子质量的对数值成反比关系。凝胶电泳不仅可以分离不同相对分子质量的 DNA ，也可以分离相对分子质量相同，但构型不同的 DNA 分子。不同构型的 DNA 分子迁移率不同。 凝胶中的 DNA 可与荧光染料溴化乙锭 (EB) 结合，在紫外灯下可看到荧光条带，籍此可分析实验结果。 [ 仪器、材料与试剂 ] （一）仪器 1. 水平电泳槽 2 ．电泳仪 3 ．紫外灯或凝胶成像仪 （二）材料 1. 冰醋酸 2. 三羟甲基氨基甲烷（ Tris ） 3. 乙二胺四乙酸（ EDTA

RT-PCR 原理与实验技术

重要，通常最佳浓度为 2 mM 左右。 ③引物和模板的量等。 五、产物的电泳和结果的测定 根据产物长度制作适宜浓度的琼脂糖凝胶（不同长度产物所需凝胶浓度），取适量 PCR 产物，加上样缓冲液充分混合，点样于事先做好的琼脂糖凝胶点样孔中，10V/cm 电泳 45－60min。成像系统成像分析。 分离不同大小 DNA 片段的合适琼脂糖浓度 六、需注意的问题 1. 注意避免有毒、有害试剂伤害自己和他人：氯仿、溴化乙锭（EB）、酚、异硫氰酸胍、紫外线等。 2. 注意避免试剂污染