- ￥3000
- 晶抗生物
- JK_C1349
- 国内
- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商：
上海晶抗生物工程有限公司
- 库存：
158
- 英文名：
HUVEC-RFP
- 生长状态：
贴壁生长
- 细胞形态：
上皮细胞样
- 物种来源：
人
- 组织来源：
脐静脉
- 规格：
1x10⁶cells/T25或1mL冻存管
| 一、基本信息 |
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| 细胞名称 |
|
| 细胞规格 |
1x10⁶cells/T25培养瓶或者1mL冻存管 |
| 种属来源 |
人 |
| 组织来源 |
脐静脉 |
| 细胞形态 |
上皮细胞样 |
| 细胞简介 |
Luciferase HUVEC细胞稳定表达萤光蛋白。该细胞株性状稳定，培养时不需要添加抗生素维持。可用作萤光蛋白活性检测中的阳性对照，也可用于活体动物成像实验。HUVEC-RFP细胞通过慢病毒转染的方式携带RFP基因。该细胞来源于人静脉内皮，可在半固体培养基中形成克隆，在免疫抑制小鼠中不能形成肿瘤。 |
| puro药筛浓度 |
HUVEC-RFP细胞puro药筛浓度为1.0ug/ml，培养过程中可不用再添加puro，如若担心抗性随着传代时间降低，可定期用0.5ug/ml浓度puro维持 |
| 细胞代数 |
10代以内 |
| 生物安全等级 |
1 |
| 生长特性 |
贴壁生长 |
| 生长条件 |
气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃ |
| 培 养 基 |
ECM专用培养基 |
| 冻存条件 |
无血清冻存液，液氮储存 |
| 细胞货期 |
现货，1周左右 |
| 供应范围 |
仅用于科研使用，不得用于其它用途 |
| 二、细胞培养操作 |
|
| Ｔ25瓶 |
|
| 收货处理 |
观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁，将T25瓶置于37度培养箱放置2-4h，以便稳定细胞状态 |
| 传代密度 |
细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养 |
| 传代比例 |
首次传代建议1：2传代，1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿 |
| 传代方法 |
a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02% EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-3min（视细胞情况而定），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 |
| 注意事项 |
1. 运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 2. 因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。 |
| 冻存管 |
|
| 收货处理 |
到细胞后，需立即转入液氮冻存或直接复苏 |
| 传代密度 |
第二天换液并检查细胞密度 |
| 传代比例 |
一管细胞建议接种到10cm培养皿或者T25瓶 |
| 传代方法 |
将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL培养基，培养过夜）第二天换液并检查细胞密度。 |
| 注意事项 |
1. 收货时若发现干冰化完，检查冻存管是否融化，若已融化需直接离心细胞接种观察，若未融化可以将细胞按正常步骤保存。 2. 为保证细胞的高存活率，收到产品后，请立即解冻复苏细胞。 |
| 三、细胞冻存操作 |
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| 冻存液配方 |
无血清冻存液，液氮储存 |
| 细胞密度 |
待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例 |
| 冻存方法 |
a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5x106~1x107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 |
| 注意事项 |
冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案 |
| 四、售后服务 |
|
| 细胞予重发 |
1. 细胞运输中遭遇的各种问题，细胞丢失瓶身破损、培养液严重漏液等，重发。 2. 收到细胞未开封，如出现污染状况，重发。 3. 收到细胞3天内，发现污染问题，经核实后，重发。 4. 常温发货的细胞静置2小时后，干冰冻存发货的细胞复苏2天后，绝大多数细胞未存活，经核实后，重发。 5. 常温发货的细胞静置22小时并且未开封或干冰冻存发货的细胞复苏2天后，出现污染，经核实后，重发。 6. 细胞活性问题，请在收到产品3天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，经核实后，重发。 |
| 细胞不重发 |
1. 客户操作造成细胞污染，不重发。 2. 客户严重操作失误致细胞状态不好，不重发。 3. 非我们推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发。 4. 细胞状态不好，未提供真实清晰的培养前3天的细胞状态照片，不重发。 5. 细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的，不重发。 6. 收到细胞发现问题与客服人员沟通的时间证明大于3天的，不重发。 |
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文献和实验固定和透化 在培养板中将已爬好细胞的盖玻片用 1 × PBS 浸洗 3 次，每次 3 min。 用 4% 的多聚甲醛固定爬片 15 min，1 × PBS 浸洗玻片 3次，每次 3 min。 0.5%Triton X-100(1× PBS 配制 )室温通透细胞 15 min（细胞膜上表达的抗原省略此步骤）, 1 × PBS 浸洗玻片 3 次，每次 3 min。 封闭 吸水纸吸干 1 ×PBS，在玻片上滴加 5% 的正常血清（与二抗种属来源一致或相似），室温封闭 1 h
实验流程：多靶点免疫荧光染色的实验操作与普通单标记免疫组化流程相似。试剂盒中的荧光染料可以在HRP酶的作用下将信号共价结合到抗原上，随后即可衔接下一轮单标染色，直至全部标记完成，即可复染DAPI后封片观察。1.脱蜡水合：1）新鲜二甲苯浸片10min,重复3次。2）梯度乙醇浸片，100% 5min；95% 5min；70% 2min。3）灭菌水洗片1min，重复3次。4）10%中性福尔马林浸片10min，灭菌水洗片1min，重复3次。2.微波修复：1)将脱蜡水合后的玻片置于修复杯中，用抗原
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