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1-3年
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999
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亦高生物
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3483-12-3
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D9779-1G

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文献和实验巯(SH)基 SH-group,sulfhydryl group
生理上重要的物质如辅酶 A、泛酰巯基乙胺、二氢硫辛酸( dihydrolipoic acid)、还原型的谷胱甘肽、半胱氨酸等均有 SH基,在酶或激素中 SH基为不可缺的组成部分。此基团极富反应性,用特异的试剂( SH试剂)或显色反应很容易检验出来。含于蛋白质中的 SH基,由于其存在状态而反应性不同,亦有蛋白质变性后才检验出 SH基。以 SH基为必需基团的酶称为 SH酶。用 SH试剂封阻 SH基能使酶失活,但是能为还原型的谷胱甘肽、半胱氨酸、二硫苏糖醇等再活化或保持稳定。 SH基容易
试剂与设备 1. 表达待检测蛋白质的细菌 2. 50mmol/L Tris-Cl (pH7.4) 3. 2×SDS凝胶加样缓冲液 100mmol/L Tris-Cl (pH 6.8)200mmol/L 二硫苏糖醇(DTT)4% SDS(电泳级)0.2% 溴酚蓝20% 甘油不含有二硫苏糖醇(DTT)的2×SDS凝胶加样缓冲液可保存于室温,临用前须从1mol/L二硫苏糖醇储存液现用现加于上述缓冲液中。
处理的时候Shapiro用的是37℃保温3h(之后的文献就是用这样的加热方法),而在Lammli的报道中用的是沸水浴中1.5分钟,而在另外的文献中有用60-70℃30分钟,95℃4分钟等等.我们知道蛋白质溶液中加入SDS和巯基乙醇(二硫苏糖醇,DTT也可),SDS主要通过疏水作用与蛋白结合,一定的SDS单体浓度下,大约结合比例为1.4g SDS/1g蛋白(引自PNAS,1970,66,1002-1007,作者是Reynolds),而巯基乙醇使蛋白二硫键还原,有利于蛋白质与SDS的结合,蛋白样品被加热变性能使SDS
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