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999
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亦高生物
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T4049-100ML

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文献和实验问:请问哪位仁兄能告知一下EDTA-胰蛋白酶的配制。急用!多谢!答:1、胰酶是0.25%,这是质量体积比,就是说0.25g胰酶溶于100ml PBS,注意,尽量不要用水来溶,因为要保持渗透压。2、EDTA的工作液溶度是0.02%-0.1%,根据细胞消化的难易程度自己调整。EDTA并不是必须的,容易消化的细胞可不加。EDTA对细胞贴壁性有影响,因此使用时要甚重。如果影响贴壁,但消化时必须要用,那么在用完全培养基终止消化后,可离心弃上清,再加完全培养基培养,可去除EDTA。如果对贴壁没
2、器材(1)胰脏(2)组织捣碎机(3) 离心机(4)磁力搅拌器(5)透析袋、20目筛网、纱布、水浴锅(6)烧杯、量筒、刻度吸管、 试管 、玻璃漏斗(7)布氏漏斗、抽滤瓶、温度计、滴管、玻璃搅棒、纱布、pH试纸等 [方法和步骤] 方法一1、 胰蛋白酶原的提取取新鲜胰脏约150g,剥去结缔组织和脂肪,取净重100g,切成碎块,在组织捣碎机中捣碎,并加入2倍体积预冷的pH2.5~3.0乙酸化水溶液,制成匀浆。浆液倒入500mL烧杯中,用10
mM Gly-NaOH(pH 9~12),所有缓冲液均为 25℃ 下配制。底物在 25℃ 温浴 10 分钟后,开始测活。 2. pH 稳定性的研究 取活性为 10 mg/ml 纯酶液,分别在 pH 3~12 缓冲液中稀释 10 倍,在 25℃ 下温浴 2 h,取样品测定酶活,以水浴前酶液初始活性作为 100%,计算残余活性。缓冲液依次为 25 mM NaAc-HAc (pH 3~6),25 mM Tris-HCl (pH 7~8),25 mM Gly-NaOH (pH 9~12),所有缓冲
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