Lavendustin B

本产品仅供科学实验研究使用! 不能用于临床或动物诊断！

产品名称	Lavendustin B	产品货号	CS-01Y64877
规格	5mg 10mg 25mg 50mg	CAS号	125697-91-8
含量	>95.00%	分子式	C21H19NO5
分子量	365.4	用途	仅供科研研究使用

产品描述: 

 
Lavendustin B is a competitive inhibitor of glucose transporter 1 (Glut1; Ki = 15 μM).1 It is also an inhibitor of the interaction between HIV-1 integrase and LEDGF/p75 (IC50 = 94.07 μM).2 Lavendustin B is a weak inhibitor of tyrosine kinases (IC50 = 0.49 μg/ml) and has been used as a negative control for the protein tyrosine kinase inhibitor lavendustin A .3,4,5References1. Vera, J.C., Reyes, A.M., Velásquez, F.V., et al. Direct inhibition of the hexose transporter GLUT1 by tyrosine kinase inhibitors. Biochemistry 40(3), 777-790 (2001).2. De Luca, L., Morreale, F., Christ, F., et al. New scaffolds of natural origin as Integrase-LEDGF/p75 interaction inhibitors: Virtual screening and activity assays. Eur. J. Med. Chem. 68, 405-411 (2013).3. Onoda, T., Iinuma, H., Sasaki, Y., et al. Isolation of a novel tyrosine kinase inhibitor, lavendustin A, from Streptomyces griseolavendus. J. Nat. Prod. 52(6), 1252-1257 (1989).4. Hu, D.E., and Fan, T.-P.D. Suppression of VEGF-induced angiogenesis by the protein tyrosine kinase inhibitor, lavendustin A. Br. J. Pharmacol. 114(2), 262-268 (1995).5. Alioua, A., Mahajan, A., Nishimaru, K., et al. Coupling of c-Src to large conductance voltage- and Ca2+-activated K+ channels as a new mechanism of agonist-induced vasoconstriction. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99(22), 14560-14565 (2002).
化学性质:       

 
规格：5mg 10mg 25mg 50mg
CAS：125697-91-8
别名：N/A
化学名：N/A
分子式：C21H19NO5

分子量：365.4
溶解度：DMF: 10 mg/mL,DMSO: 10 mg/mL,Ethanol: 10 mg/mL
储存条件：Store at -20°C
General tips：For obtaining a higher solubility , please warm the tube at 37 ℃ and shake it in the   ultrasonic bath for a while.
Shipping Condition: Evaluation sample solution : ship with blue ice All other available size: ship with RT , or   blue ice upon request
使用方法: 

 
1. 常用筛选浓度
　　注意：用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve)，即剂量反应性曲线，来确定最佳筛选浓度。
　　一般而言，哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 杀灭曲线的建立
　　注意：为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度，可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现，至少选择5个浓度。
1) 第一天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜;注：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。
2) 根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml，然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。
3) 第二天：替换旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4) 接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5) 按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10天)内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。
3. 稳定转染细胞的筛选
1) 转染48h后，用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。
　　注意：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤。则当细胞过于稠密，其效率会降低。为了得到较好的筛选效果，最好将细胞稀释至丰度不超过25%
2) 每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。
3) 筛选7天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。
4) 挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5) 之后更换正常培养基培养即可。
蛋白酶抑制剂混合物实验步骤: 

 
(1)Lavendustin B实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::yi戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的yi戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::yi戊醇(25:24:1)抽提两次,:yi戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
公司正在出售的产品: 

 

Fmoc-D-Arg(Mtr)-OH	Boc-D-N-Me-Ala-OH
H-Phe(4-NH2)-OH	人艾杜糖硫酸酯酶ELISA试剂盒
Fmoc-Ala-OH	人半胱氨酸蛋白酶抑制剂1ELISA试剂盒
Boc-D-Cys(pMeBzl)-ol	人叶酸受ELISA试剂盒
H-Ala(3-pyridyl)-OMe.2HCl	人胆固醇-25-羟化酶ELISA试剂盒
H-Trp-OMe.HCl	人糖化血红蛋白ELISA试剂盒
TCFH	人谷胱甘肽过氧化物酶ELISA试剂盒
Fmoc-D-Allo-Ile-OH	人脂蛋白AELISA试剂盒
H-Glu(OcHex)-OH	人死骨片1ELISA试剂盒
H-His(Trt)-OH	人氨基酰化酶1ELISA试剂盒
H-Phe-2-Chlorotrityl Resin	人抗卵巢抗ELISA试剂盒
Ac-His(Trt)-OH	人甘丙肽ELISA试剂盒
Z-Threoninol	Lavendustin B人Wnt-3a蛋白ELISA试剂盒
Garenoxacin (BMS284756)	人布鲁东氏酪氨酸激酶ELISA试剂盒
人β氨基己糖苷酶AELISA试剂盒	人血吸虫ELISA试剂盒