Recombinant Human Mob1A

重组蛋白的制备涉及多个步骤，包括基因克隆、表达系统选择和蛋白纯化：
● 基因克隆：基因克隆是将目标基因导入表达载体中的过程。研究人员可以选择不同的克隆方法，如限制性酶切克隆、PCR扩增克隆等，根据需要构建目标基因的DNA序列。
● 表达系统选择：选择适合的表达系统是重组蛋白制备的关键一步。常用的表达系统包括大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞。每种表达系统都具有不同的优缺点，适用于不同类型的蛋白质表达。
5大蛋白表达系统：

表达、纯化、复性和定量，具体步骤如下：
一、重组蛋白质的诱导表达
1. 挑取转化有质粒的单菌落， 接种于 3ml 选择性 LB 液体培养基中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养过夜。
2. 次日将培养过夜的菌液 500 μl 再接种于 10ml（1:20）选择性 LB 液体培养基 中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养至光密度（OD600=0.6）时，取 1 ml 样本作 为诱导前标本， 10000g 离心 1min 收集菌体沉淀，－20 oC 冻存备用。
3. 加入 1 mol/L IPTG 于菌液中，使 IPTG 终浓度为 1 mM ，37 oC ，250 rpm/min 振摇培养 4 ～ 5 小时。取 1 ml 样本作为诱导后标本，同上法收集菌体沉淀， -20 oC 冻存备用。
4. 将诱导前后菌体沉淀用 20 ~ 40 μl PBS（pH= 8.0）重悬， 加入等体积的 2×SDS 上样缓冲液， 煮沸加热 5min，SDS 凝胶（SDS-PAGE）电泳分离 ， 考马斯亮蓝染色 3 小时后，脱色观察结果。
5. 选取诱导成功的细菌克隆，扩大诱导规模，收集菌体沉淀，于－ 20 oC 保存，准备做下一步分析及纯化。

二、重组蛋白质的分离纯化
重组蛋白质的可溶性鉴定
1. 将按上法诱导培养后收集的菌体重悬于裂解液 1 (Lysis buffer under native conditions )中，然后在－80 oC 低温冰箱中放置 10 min。
2. 冰中解冻。
3. 在冰浴上用超声破碎仪破菌 6 次， 每次 10 sec，间歇 10 sec，电压 200-300 V。
4. 10000g，4oC，离心 20min，取上清（为溶液 A）， － 20 oC 保存； 另将沉淀用 同样裂解液 1 溶解（为溶液 B），同样 －20 oC 保存，供后继分析使用。
5. 将上述 A、B 溶液和诱导前后的细菌进行 SDS-PAGE 电泳， 考马斯亮蓝染色， 比较分析重组蛋白质的溶解性。如果诱导表达的蛋白质位于 A 溶液中， 则为
可溶性蛋白；如果是在 B 溶液中，则为非可溶蛋白。
重组蛋白质为非可溶性蛋白（ 变性条件下）的分离纯化
1. 将菌体沉淀溶于适量裂解液 2（Lysis buffer under denaturing conditions ）中，室温下搅拌和吹打沉淀，避免泡沫生成。
2. 10000g ，4 oC，离心 30 min，收集上清液。
3. 将 Ni-NTAAgarose 充填柱子，并连接于 Pharmarcia 低压液相层析系统，用 5 倍柱体积的裂解液 2 平衡 Ni-NTAAgarose，调节 A280 值至零线。
4. 将适量上清液上样到 Ni-NTAAgarose 柱子中， 并用 lysis buffer 冲洗至 A280 值低于 0.01。
5. 分别用 5 ～ 10 倍柱体积的清洗液 1 和清洗液 2（Washbuffer 1 and 2）清洗柱 子，直至 A280 值低于 0.01。
6. 用洗脱液（Elution buffer）洗脱重组蛋白质， 在 A280 值监测下，收集出现峰 线后含有重组蛋白的所有洗脱液。
​​​​​ 公司正在出售的产品：
​​​​​​产毒培养基      Toxin-Producing Medium  250  用于青霉、曲霉的产毒培养    生长激素(GH)重组蛋白 Recombinant Growth Hormone (GH)
布氏肉汤      Broth  250  用于弯曲杆菌增菌肉汤和布氏琼脂制备(SN标准)    MUC1 Mucin-1 / MUC-1 蛋白 (Fc 标签) Protein
布氏琼脂      Agar  250  用于弯曲杆菌分离(SN标准)    GFRA3 Protein Human  GFRA3 / GFR-alpha-3 蛋白 (His & Fc 标签)
  Bolton Selective Enrichment broth  250  用于弯曲杆菌选择性增菌培养(Merck方法)    HA Protein Influenza 重组甲型流感 H13N8 (A/black-headed gull/Nlands/1/00) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 标签)
培养基     Malonate Broth  10  生化培养基，用于细菌盐利用试验（GB、SN标准）    DPP4 DPP4 / DPPIV / CD26 蛋白 Protein
标准II号营养琼脂  Standard II Nutrient Agar  250  细菌计数、不含糖，可作血琼脂基础和传代用(MERCK方法)    趋化因子C-X-C-基元配体16(CXCL16)重组蛋白 Recombinant Chemokine C-X-C-Motif Ligand 16 (CXCL16)
苯脱酶培养基     Phenylalanine Deaminase  Medium  100  用于苯脱酶试验    CGA FSH alpha / TSH alpha / CGA 蛋白 (Fc 标签) Protein
北沙参亚碲酸胨水培养基基础  Beisachang Sodium Tellurite Broth Base  250  用于球菌的增菌培养。每100ml培养基需另加入1%亚碲酸0.2ml    GFRA3 Protein Human  GFRA3 / GFR-alpha-3 蛋白 (His 标签)
坂崎杆菌显色培养基  Enterobacter sakazakii Chromogenic Medium  1000ml  用于坂崎杆菌的显色培养，坂崎杆菌显蓝色，其它肠杆菌显无色。    HA Protein Influenza B 重组乙型流感 (B/Brisbane/60/2008) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 标签)
YM11琼脂  YM11 Agar  250  滤膜法用于霉菌、酵母菌的分离培养(NEOGEN方法)    CD86重组食蟹猴 CD86 / B7-2 蛋白 (His 标签) Protein
YGC琼脂  YGC Agar  250  用于奶和奶制品中霉菌及酵母菌分离培养(ISO方法)    Ki-67(Antigen identified by monoclonal antibody Ki 67 0.5mgKi-67(Antigen identified by monoclonal antibody Ki 67) Ki-67 Antigen
XLT4琼脂  XLT4 Agar  250  用于食品中致病菌，特别是沙门氏菌分离培养(Merck方法)    CD276 B7-H3 / CD276 蛋白 (His 标签) Protein
Recombinant Human Mob1AXLD 培养基        Xylose Lysine Desoxycholate Medium  250  选择性培养基，主要用于分离志贺氏菌属，亦可用于分离沙门氏菌(FDA标准)    GGCT Protein Human  GGCT 蛋白 (His 标签)WORT 肉汤  Wort Broth  250  用于真菌,特别是酵母菌的培养(Merck方法)    IGSF8 Protein Mouse  PGRL / IGSF8 蛋白 (Fc 标签)
WORT 琼脂  Wort Agar  250  用于真菌,特别是酵母菌的计数和增菌培养(Merck方法)    GP140类免疫缺陷病毒Ⅰ型 HIV-1 gp140 蛋白 (group M, subtype CRF07_BC) (Fc 标签) Protein
WL营养琼脂  WL Nutrient Agar  250  用于啤酒和发酵产品中酵母菌和细菌的计数    Tie1/JTK14 peptide 上皮生长因子样域酪氨酸激酶1抗原 0.5mgTie1/JTK14 peptide 上皮生长因子样域酪氨酸激酶1抗原