Recombinant Human MIC19

重组蛋白的制备涉及多个步骤，包括基因克隆、表达系统选择和蛋白纯化：
● 基因克隆：基因克隆是将目标基因导入表达载体中的过程。研究人员可以选择不同的克隆方法，如限制性酶切克隆、PCR扩增克隆等，根据需要构建目标基因的DNA序列。
● 表达系统选择：选择适合的表达系统是重组蛋白制备的关键一步。常用的表达系统包括大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞。每种表达系统都具有不同的优缺点，适用于不同类型的蛋白质表达。
5大蛋白表达系统：

表达、纯化、复性和定量，具体步骤如下：
一、重组蛋白质的诱导表达
1. 挑取转化有质粒的单菌落， 接种于 3ml 选择性 LB 液体培养基中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养过夜。
2. 次日将培养过夜的菌液 500 μl 再接种于 10ml（1:20）选择性 LB 液体培养基 中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养至光密度（OD600=0.6）时，取 1 ml 样本作 为诱导前标本， 10000g 离心 1min 收集菌体沉淀，－20 oC 冻存备用。
3. 加入 1 mol/L IPTG 于菌液中，使 IPTG 终浓度为 1 mM ，37 oC ，250 rpm/min 振摇培养 4 ～ 5 小时。取 1 ml 样本作为诱导后标本，同上法收集菌体沉淀， -20 oC 冻存备用。
4. 将诱导前后菌体沉淀用 20 ~ 40 μl PBS（pH= 8.0）重悬， 加入等体积的 2×SDS 上样缓冲液， 煮沸加热 5min，SDS 凝胶（SDS-PAGE）电泳分离 ， 考马斯亮蓝染色 3 小时后，脱色观察结果。
5. 选取诱导成功的细菌克隆，扩大诱导规模，收集菌体沉淀，于－ 20 oC 保存，准备做下一步分析及纯化。

二、重组蛋白质的分离纯化
重组蛋白质的可溶性鉴定
1. 将按上法诱导培养后收集的菌体重悬于裂解液 1 (Lysis buffer under native conditions )中，然后在－80 oC 低温冰箱中放置 10 min。
2. 冰中解冻。
3. 在冰浴上用超声破碎仪破菌 6 次， 每次 10 sec，间歇 10 sec，电压 200-300 V。
4. 10000g，4oC，离心 20min，取上清（为溶液 A）， － 20 oC 保存； 另将沉淀用 同样裂解液 1 溶解（为溶液 B），同样 －20 oC 保存，供后继分析使用。
5. 将上述 A、B 溶液和诱导前后的细菌进行 SDS-PAGE 电泳， 考马斯亮蓝染色， 比较分析重组蛋白质的溶解性。如果诱导表达的蛋白质位于 A 溶液中， 则为
可溶性蛋白；如果是在 B 溶液中，则为非可溶蛋白。
重组蛋白质为非可溶性蛋白（ 变性条件下）的分离纯化
1. 将菌体沉淀溶于适量裂解液 2（Lysis buffer under denaturing conditions ）中，室温下搅拌和吹打沉淀，避免泡沫生成。
2. 10000g ，4 oC，离心 30 min，收集上清液。
3. 将 Ni-NTAAgarose 充填柱子，并连接于 Pharmarcia 低压液相层析系统，用 5 倍柱体积的裂解液 2 平衡 Ni-NTAAgarose，调节 A280 值至零线。
4. 将适量上清液上样到 Ni-NTAAgarose 柱子中， 并用 lysis buffer 冲洗至 A280 值低于 0.01。
5. 分别用 5 ～ 10 倍柱体积的清洗液 1 和清洗液 2（Washbuffer 1 and 2）清洗柱 子，直至 A280 值低于 0.01。
6. 用洗脱液（Elution buffer）洗脱重组蛋白质， 在 A280 值监测下，收集出现峰 线后含有重组蛋白的所有洗脱液。
​​​​​ 公司正在出售的产品：
​​​​​​三糖铁琼脂（TSI）     Triple Sugar Iron Agar  250  用于肠杆菌科细菌的生化反应筛选（葡萄糖，乳糖，蔗糖）    GPR37 Protein Human  GPR37 蛋白 (His 标签)
XLD 琼脂        Xylose Lysine Desoxycholate Agar  250  选择性培养基，用于志贺氏菌的选择性培养(FDA标准)    LIFR Protein Mouse  LIFR / CD118 蛋白 (His 标签)
MH 肉汤（MHB）     Mueller-Hinton Broth  250  用于抗生素敏感试验    F7 Coagulation Factor VII / FVII / F7 蛋白 (His 标签) Protein
中国蓝琼脂       China Blue Agar  250  弱选择性培养基，用于肠道致病菌的选择性分离    CCR-4(C-C chemokine receptor 4 0.5mgCCR-4(C-C chemokine receptor 4) 细胞表面趋化因子受体4抗原
克氏双糖铁琼脂      Kligler Iron Agar  250  用于细菌复合生化试验（葡萄糖，乳糖）    DUSP14 DUSP14 / MKP-6 蛋白 (His & MBP 标签) Protein
血琼脂基础2号  Blood Agar Base N0.2  250  供分离营养要求非常高的致病菌用，后加血液制成血平板    GPR56 Protein Human  GPR56 / TM7LN4 蛋白 (His 标签)
血液琼脂基础       Blood Agar Base  250  供分离营养要求较高的致病菌用，后加血液制成血平板    CCL3 Protein Rat  CCL3 / Mip1a 蛋白
化三苯四氮唑-沙保罗培养基    TTC-Sabourand’s Medium  250  用于分离真菌，酵母菌等    SEMA4D Semaphorin 4D / SEMA4D / CD100 蛋白 (His 标签) Protein
麦康凯琼脂       Maconkey Agar  250  用于肠道致病菌的选择性分离、培养(OXOID方法)    FOXJ1/HFH-4 peptide 插头蛋白J1抗原 0.5mgFOXJ1/HFH-4 peptide 插头蛋白J1抗原
麦康凯琼脂(不含盐)      Maconkey Agar(without salt)  250  用于肠道致病菌的选择性分离、培养(OXOID方法)    SULT1A1 SULT1A1 / STP1 蛋白 (His 标签) Protein
麦康凯琼脂2号       Maconkey Agar No.2  250  用于肠道致病菌的选择性分离、培养(OXOID方法)    GPX7 Protein Human  GPX7 / Glutathione Peroxidase 7 蛋白 (Fc 标签)
碱性琼脂平板      Alkaline Agar  250  用于分离菌    EPHB4 Protein Mouse  EphB4 / HTK 蛋白 (His 标签)
Recombinant Human MIC19碱性胆盐琼脂      Alkaline Bile Salt Agar  250  用于分离菌    IL2RB CD122 / IL2RB / IL2 Receptor beta 蛋白 (His 标签) Protein胰膘肉汤基础      Tryptose Broth Base  100  用于肺炎链球菌、菌属细菌的培养    基质金属蛋白酶7(MMP7)重组蛋白 Recombinant Matrix Metalloproteinase 7 (MMP7)
豆粉琼脂（血琼脂基础）    Blood Agar Base  250  用于配制血琼脂、巧克力琼脂及亚碲酸盐琼脂    CALCB CALCB / CGPR / Calcitonin 2 蛋白 (Fc 标签) Protein