Recombinant Human DNA polymera

商品属性：

货号	XG-DB1786	种属	Human
宿主	E.Coli	表达区间	1-494
分子量	54.2 kDa	标签	N-terminal His Tag
规格	50μg、200ug、1mg	用途	仅供科研实验

商品介绍：

别称：DNA-directed DNA polymerase mu, DNA-directed DNA/RNA polymerase mu, DPOLM_HUMAN, FLJ35482, Pol iota, Pol Mu, Polm, POLM protein, Polymerase (DNA directed) mu, Polymerase DNA directed mu, Tdt N, Tdt-N, TdtN, Terminal transferase  纯度 Greater than 95% as determined by SDS-PAGE 应用  Western Blot, ELISA 性状  Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4 溶解方法Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex 存储 -20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution

表达、纯化、复性和定量，具体步骤如下：
一、重组蛋白质的诱导表达
1. 挑取转化有质粒的单菌落， 接种于 3ml 选择性 LB 液体培养基中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养过夜。
2. 次日将培养过夜的菌液 500 μl 再接种于 10ml（1:20）选择性 LB 液体培养基 中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养至光密度（OD600=0.6）时，取 1 ml 样本作 为诱导前标本， 10000g 离心 1min 收集菌体沉淀，－20 oC 冻存备用。
3. 加入 1 mol/L IPTG 于菌液中，使 IPTG 终浓度为 1 mM ，37 oC ，250 rpm/min 振摇培养 4 ～ 5 小时。取 1 ml 样本作为诱导后标本，同上法收集菌体沉淀， -20 oC 冻存备用。
4. 将诱导前后菌体沉淀用 20 ~ 40 μl PBS（pH= 8.0）重悬， 加入等体积的 2×SDS 上样缓冲液， 煮沸加热 5min，SDS 凝胶（SDS-PAGE）电泳分离 ， 考马斯亮蓝染色 3 小时后，脱色观察结果。
5. 选取诱导成功的细菌克隆，扩大诱导规模，收集菌体沉淀，于－ 20 oC 保存，准备做下一步分析及纯化。

二、重组蛋白质的分离纯化
重组蛋白质的可溶性鉴定
1. 将按上法诱导培养后收集的菌体重悬于裂解液 1 (Lysis buffer under native conditions )中，然后在－80 oC 低温冰箱中放置 10 min。
2. 冰中解冻。
3. 在冰浴上用超声破碎仪破菌 6 次， 每次 10 sec，间歇 10 sec，电压 200-300 V。
4. 10000g，4oC，离心 20min，取上清（为溶液 A）， － 20 oC 保存； 另将沉淀用 同样裂解液 1 溶解（为溶液 B），同样 －20 oC 保存，供后继分析使用。
5. 将上述 A、B 溶液和诱导前后的细菌进行 SDS-PAGE 电泳， 考马斯亮蓝染色， 比较分析重组蛋白质的溶解性。如果诱导表达的蛋白质位于 A 溶液中， 则为
可溶性蛋白；如果是在 B 溶液中，则为非可溶蛋白。
重组蛋白质为非可溶性蛋白（ 变性条件下）的分离纯化
1. 将菌体沉淀溶于适量裂解液 2（Lysis buffer under denaturing conditions ）中，室温下搅拌和吹打沉淀，避免泡沫生成。
2. 10000g ，4 oC，离心 30 min，收集上清液。
3. 将 Ni-NTAAgarose 充填柱子，并连接于 Pharmarcia 低压液相层析系统，用 5 倍柱体积的裂解液 2 平衡 Ni-NTAAgarose，调节 A280 值至零线。
4. 将适量上清液上样到 Ni-NTAAgarose 柱子中， 并用 lysis buffer 冲洗至 A280 值低于 0.01。
5. 分别用 5 ～ 10 倍柱体积的清洗液 1 和清洗液 2（Washbuffer 1 and 2）清洗柱 子，直至 A280 值低于 0.01。
6. 用洗脱液（Elution buffer）洗脱重组蛋白质， 在 A280 值监测下，收集出现峰 线后含有重组蛋白的所有洗脱液。
公司正在出售的产品：
远藤氏琼脂基础 (CM0479) Oxoid incubation media 远藤氏琼脂基础 (CM0479) Oxoid  TNF重组食蟹猴 / 恒河猴 TNF-alpha / TNFA / TNFSF1A / Cachectin 蛋白 Protein
水螺菌 支/瓶  MPO peptide 髓过氧化物酶抗原 0.5mgMPO peptide 髓过氧化物酶抗原
EndoAgar  S100A14重组人 S100A14 / S114 蛋白 (His 标签) Protein
临床检验培养基  TNFRSF19 Protein Human 重组人 TNFRSF19 / TROY 蛋白 (His 标签)
ModifiedCamp-BAPAgaradditiveB  CXCL12 Protein Mouse 重组小鼠 CXCL12 / SDF-1 蛋白
月桂基盐蛋白胨肉汤-MUG LST-MUG 用于O157菌检测，(GB2008标准)  DPP4重组人 DPP4 / DPPIV / CD26 蛋白 (Fc 标签) Protein
甘露醇发酵培养基 Mannitol Medium 250 生化试验培养基，用于细菌(如球菌)甘露醇发酵试验(GB标准)  趋化因子C-X3-C-基元配体1(CX3CL1)重组蛋白 Recombinant Chemokine C-X3-C-Motif Ligand 1 (CX3CL1)
氯蔗糖琼脂培养基250g/瓶用于副溶血性弧菌的分离培养incubationmedia氯蔗糖琼脂培养基250g/瓶用于副溶血性弧菌的分离培养  XIAP重组人 XIAP / BIRC4 (BIR3 domain) 蛋白 (His 标签) Protein
改良月桂基盐胰蛋白胨肉汤-万古霉素 10ml*20支/包 用于阪崎杆菌选择性增菌培养  TNFRSF1A Protein Human 重组人 TNFR1 / CD120a / TNFRSF1A 蛋白 (His 标签)
Bolton肉汤添加剂支用于添加到HB0273-1中  NA Protein H9N2 重组甲型流感 H9N2 神经酸酶 (Neuraminidase / NA) (高活性)
月桂基盐胰蛋白胨MUG培养基 LST-MUG 用于O157菌检测，不含MUG(SN标准)称取本品35.6g,加热搅拌溶解于1000ml蒸馏水中,分装到有倒立发酵管的20mm*150mm试管中，每管10ml,121℃高压灭菌15分钟，备用。 本品需使用配套添加剂MUG 称取本品35.6g,加热搅拌溶解于1000ml蒸馏水中,分装到有倒立发酵管的20mm*150mm试管中，每管10ml,121℃高压灭菌15分钟，备用。 本品需使用配套添加剂MUG  HA重组甲型流感 H5N8 (A/turkey/Ireland/1378/1983) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 标签) Protein
UVM 添加剂1 UVM Supplement1 1ml*10支 添加到HB4195中，用于李氏菌的选择性增菌培养  PACAP-27/38 腺苷酸环化酶激活肽-27/38(抗原 0.5mgPACAP-27/38 腺苷酸环化酶激活肽-27/38(抗原)
氯多粘菌素B肉汤(SPB)基础250g/瓶用于副溶血性弧菌选择性增菌，每培养基中添加05cubationmedia氯多粘菌素B肉汤(SPB)基础250g/瓶用于副溶血性弧菌选择性增菌，每培养基中添加0519  LCN1重组人 LCN1 / VEGP / Lipocalin-1 蛋白 (His 标签) Protein
TTBBroth  TNFRSF1B Protein Human 重组人 TNFR2 / CD120b / TNFRSF1B 蛋白 (aa 1-268, 196 Met/Arg, His 标签)
V-PMedium,Modified  TNFRSF9 Protein Human 重组人 CD137 / 4-1BB / TNFRSF9 蛋白 (His & Fc 标签)
Recombinant Human DNA polymerase mu月桂基盐胰蛋白胨肉汤(LST) Lauryl Sulfate Tryptose Broth 用于大肠菌群,大肠杆菌的测定(GB2008、SN标准)  AKT3重组人 AKT3 蛋白 (GST 标签) Protein
卵黄高盐琼脂基础 Egg-Yolk Salt Agar Base 250 用于生物制品球菌选择性分离  胰高血糖素(GC)重组蛋白 Recombinant Glucagon (GC)
牛心汤培养基250g/瓶用于链球菌增菌incubationmedia牛心汤培养基250g/瓶用于链球菌增菌  HA重组甲型流感 H5N1 (A/Hong Kong/483/97) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 标签) Protein
Trypticase-Soy-PolymyxinBrothBase  TNFRSF1B Protein Human 重组人 TNFR2 / CD120b / TNFRSF1B 蛋白 (His 标签)
BacterialOrganoMedium  EFNB2A Protein Danio rerio (zebrafish) 重组斑马鱼 EFNB2A / Ephrin B2a 蛋白 (Fc 标签)
重组蛋白的制备涉及多个步骤，包括基因克隆、表达系统选择和蛋白纯化：
● 基因克隆：基因克隆是将目标基因导入表达载体中的过程。研究人员可以选择不同的克隆方法，如限制性酶切克隆、PCR扩增克隆等，根据需要构建目标基因的DNA序列。
● 表达系统选择：选择适合的表达系统是重组蛋白制备的关键一步。常用的表达系统包括大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞。每种表达系统都具有不同的优缺点，适用于不同类型的蛋白质表达。
5大蛋白表达系统：

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