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- DM-CM1049
- 上海
- 2026年01月09日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保质期：
6个月
- 保存条件：
2-8°
- 供应商：
上海笃玛生物科技有限公司
- 库存：
999
- 规格：
100管/96样
葡萄糖脱氢酶（Glucose dehydrogenase，GCDH）试剂盒说明书
微量法 100管/96样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
GCDH（EC 1.1.1.47）催化D-葡萄糖和NAD(P)生成D-葡萄糖酸和NAD(P)H，大量存在于高等动物的肝脏和弱氧化醋杆菌中。在低聚果糖生产中使用GCDH，不仅能去除低聚果糖中的葡萄糖提高低聚果糖的含量，而且生成的葡萄糖酸与钙离子结合生成的葡萄糖酸钙是一种理
想的补钙制剂。因而，GCDH已成为制备高含量低聚果糖的理想用酶。
测定原理：
GCDH催化D-葡萄糖和NAD生成D-葡萄糖酸和NADH，在340nm下测定NADH上升速率，即可反映GCDH活性。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
提取液：100mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体19 mL×1瓶， 4℃保存；
试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存；
样本的前处理：
组织的前处理：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
细菌或培养细胞的前处理：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1、 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零；
2、 工作液的配制：临用前将试剂二转移到试剂一中混合溶解待用；用不完的试剂4℃可保存一周；
3、 将工作液置于37℃预热5分钟。
4、 在1mL石英比色皿中加入10μL样本和190μL工作液，立即混匀，记录340nm处初始吸光值A1和1min后的吸光值A2，计算ΔA=A2-A1。
GCDH活性计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下：
（1）按样本蛋白浓度计算
单位定义：每mg组织蛋白每分钟生成1nmol NADH定义为一个酶活力单位。
GCDH（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr) ÷T=3215×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算
单位定义：每g组织每分钟生成1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
GCDH（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(W ×V样÷V样总)÷T=3215×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟生成1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
GCDH（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(500×V样÷V样总) ÷T=6.43×ΔA
V反总：反应体系总体积，2×10-4 L；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.01 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，1 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。
b.用96孔板测定的计算公式如下：
（1）按样本蛋白浓度计算
单位定义：每mg组织蛋白每分钟生成1nmol NADH定义为一个酶活力单位。
GCDH（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算
单位定义：每g组织每分钟生成1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
GCDH（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(W ×V样÷V样总)÷T=6430×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟生成1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
GCDH（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(500×V样÷V样总) ÷T=12.86×ΔA
V反总：反应体系总体积，2×10-4 L；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：96孔板光径，0.05cm；V样：加入样本体积，0.01 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，1 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。
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文献和实验高等动物（牛、羊、狗、猫等）的肝脏及弱氧化醋杆菌（ Acetobacter subaxydans等）中存在的一种酶。催化 D-葡萄糖 NAD（ P） D-葡糖酸（的内酯） NAD（ P） H的反应。来源于动物的酶（ EC． 1． 1． 1． 47）既能利用 NAD，也能利用 NADP。虽然对 D-木糖也显有 25％的活性，但对其他天然己糖和戊糖则几乎没有作用（动物）。醋酸杆菌属（ Acetobacter）的酶（ EC1． 1． 1． 119）对 NADP具有是特异的作用，但也能作用
从特异青霉（Penicillium notatum）等霉菌和蜂蜜中发现的酶。它能催化 D-葡萄糖 O2 D-葡糖酸（的δ -内酯） H2 O2 的反应。 EC1． 1． 3． 4．特异青霉（ P． notatum）的酶以其显有抗菌性而引入注意。因此，也有葡糖氧化酶（ notatin）的称呼，现已清楚，抗菌性是由于反应生成的 H2 O2 具灭菌作用。提纯物含有 2分子的 FAD，作为电子受体，除 O2 外，也能与 2， 6，二氯酚、靛酚反应。该酶对葡萄糖具有特异性。米氏
在有葡萄糖的培养基中生长的细菌，降低特定酶的合成。一般的解释是由于葡萄糖的代谢产物，细胞的环腺苷酸量减少，因而环腺苷酸从酶合成系统的正控制物 cAMP受体蛋白质与 cAMP的复体分离而纯化，从而降低了酶的合成率。 1942年由 J． Mond和 H． M． R． Epps、 E． F． Gale有报道。
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