本试剂盒仅供科研使用
谷胱甘肽还原酶（GR）活性测定试剂盒说明书
（货号：WS9020F 分光法 48 样）
一、产品简介：
谷胱甘肽还原酶（GR，EC 1.6.4.2）是在动植物中都有发现，是一类黄素蛋白氧化还原酶，催化氧化型
谷胱甘肽(GS SG)还原成还原型谷胱甘肽（GSH），GSH / GS SG的比率越高，则越能清除氧化胁迫过程中产
生的活性氧，因此GR酶活性高低是衡量氧化应激能力的一个重要指标。
本试剂盒采用Ellman方法，DTNB与GR中GS SG还原产生GSH反应，生成黄色产物（TNB）。该产物在412nm
出有最大吸收。TNB生成量和GR活性成线性正相关，可通过测定412nm处吸光值计算出谷胱甘肽还原酶
（GR）的活性水平。该方法在可见光下测定，检测产物相对传统测试方法灵敏度高、测定物更稳定、可操
作性更强。另外，改进样本的前处理，加相应试剂先消除样本本身的GSH含量，以确保检测结果的精确度。
二、试剂盒组分与配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 80mL×1 瓶
4℃保存
试剂 A
液体 0.25 mL×1 支
4℃保存
用前甩几下或 4℃离心使试剂落入
试管底部，避免试剂浪费。
试剂 B
粉剂 mg×1 支
-20℃保存
用前甩几下或 4℃离心使试剂落入
试管底部，再加 0.3 mL 蒸馏水溶
解备用，现配现用。
试剂一
粉剂 mg×1 瓶
4℃保存
用前甩几下或 4℃离心使试剂落入
试管底部，再加 25mL 蒸馏水溶解。
试剂二
粉剂 mg×2 支
4℃保存
用前甩几下或 4℃离心使试剂落入
试管底部，每支再加 1.1mL 蒸馏水
溶解；溶解后-20℃保存 2 周。
试剂三
液体 2.5mL×1 瓶
4℃保存
固体出现可以 25℃水浴 5min，使其
呈液体状态。
三、所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、低温离心机、水浴锅、移液器、蒸馏水。
四、谷胱甘肽还原酶（GR）活性测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备
（1）组织样本：
① 称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。4℃×12000rpm 离心 20min。
② 取出 200μL 上清液转移到新的 EP 管中，加入 5μL 试剂 A（留意观察，有气泡产
生），25℃静置 5min；
③ 再加入 5μL 试剂 B（观察，会出现气泡或无气泡等现象，均属正常现象，均不影
响后续实验），25℃静置 5min。作为上机检测的样本粗提液。
【注】：①根据实验室条件，可先液氮研磨，再加提取液，进行冰浴匀浆
②根据研究需求，可按组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：10 的比例进行提取。
（2） 细菌/细胞样本：
① 先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细胞加入 1mL本试剂盒仅供科研使用
2
提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30
次）；12000rpm 4℃离心 10min，取上清备用。
② 取出 200μL 上清液转移到新的 EP 管中，加入 5μL 试剂 A（留意观察，有气泡产
生），25℃静置 5min；
③ 再加入 5μL 试剂 B（观察，会出现气泡或无气泡等现象，均属正常现象，均不影
响后续实验），25℃静置 5min。作为上机检测的样本粗提液。
【注】：①根据实验室条件，可先液氮研磨，再加提取液，进行冰浴匀浆。
②若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。
（3）液体样本：
取 200μL 液体转移到新的 EP 管中，加入 5μL 试剂 A，25℃静置 5min；再加入 5μL
试剂 B，25℃静置 5min。作为上机检测的样本粗提液。
2、上机检测
① 可见分光光度计预热 30 min，设置温度在 25ºC，设定波长到 412 nm，蒸馏水调零。
② 所有试剂至室温或 25℃水浴锅中温育 10min。在 1mL 玻璃比色皿中依次加入：
试剂名称（μL）
测定管
试剂一
400
提取液
240
样本
80
试剂二
40
试剂三
40
立即混匀，于412nm波长下30s时读取初始吸光度A1，室温
（25℃）条件下孵育10min后再读取A2，△A= A2-A1。
【注】：1、若△A 小于 0.01，可延长反应时间 T（如延长到 20min 后读 A2）或增加 V1（如由 80μL 增
至 160μL，则提取液相应减少），则改变后的 T 和 V1 代入公式重新计算；若所测△A 值
依然在零点附近徘徊，可能样本 GR 酶活性低，建议浓缩样本后再进行测定；
2、△A 每分钟变化宜在 0.005-0.1，若样本 GR 酶活性过高，建议样本稀释 2~5 倍后再进行测定。
3、本试剂盒检测时牵涉到氧化还原反应，所有氧化剂或还原剂都会干扰本试剂盒的测定，另
外硫酸钠、硫酸铵和铁*化物都会干扰本试剂盒的测定。请尽量避免。
五、结果计算：
1、按蛋白浓度计算：
酶活定义：每毫克蛋白每分钟还原 1nmol GS SG 生成 2nmol GSH 为 1 个酶活单位。
GR 酶活(nmoL/min/mg prot)=(△A÷ε÷d÷2×109×V2)÷(Cpr×V1)÷T×D=36.8×△A÷Cpr×D
2、按样本质量计算：
酶活定义：每克样本每分钟还原 1nmol GS SG 生成 2nmol GSH 为 1 个酶活单位。
GR 酶活(nmoL/min/g 鲜重)=(△A÷ε÷d÷2×109×V2)÷(W×V1÷V)÷T×D=36.8×△A÷W×D
3、按细胞/细菌数量计算：
酶活定义：每 104个细胞/细菌每分钟还原 1nmol GS SG 生成 2nmol GSH 为 1 酶活单位。
GR 酶活(nmoL/min/104 cell)=(△A÷ε÷d÷2×109×V2)÷(500×V1÷V)÷T=0.074×△A
4、按液体体积计算：
酶活定义：每毫升液体每分钟还原 1nmol GS SG 生成 2nmol GSH 1 个酶活单位。
GR 酶活(nmoL/min/mL)=(△A÷ε÷d÷2×106×V2)÷V1÷T=36.8×△A
ε---TNB 摩尔消光系数，1.36×104 L/mol/cm； d---光径，1 cm；2---1μmol GS SG 生成 2μmol GSH；
V---提取液体积，1 mL；
V1---加入体系中样本体积，80μL =8×10-2 mL； W---样本质量，g；
V2---反应体系总体积，800μL=8×10-4 L； D---稀释倍数，未稀释即为 1； T---反应时间，10min；
Cpr---上清液蛋白浓度（mg/mL）；建议使用本公司 BCA 蛋白质含量检测试剂盒。
文献和实验
技术资料