肌酸激酶(CK)测试盒 提供技术指导

肌酸激酶(CK)测试盒  提供技术指导
用于体外定量测定人血清或血浆中肌酸激酶含量的试剂盒，它是采用分光光度法原理，利用全自动、半自动生化分析仪或分光光度计，在医学实验室进行肌酸激酶定量检验所使用的临床化学体外诊断试剂。

分类
按检测原理分为以下两类
1. 肌酸激酶测定试剂盒（酶偶联法）。包括连续监测法、IFCC推荐法、速率法、N-乙酰半胱氨酸法、磷酸肌酸底物法。
2. 肌酸激酶测定试剂盒（比色法）

原理
肌酸激酶（CreatineKinase,CK）通常存在于动物的心脏、肌肉以及脑等组织的细胞浆和线粒体中，是一个与细胞内能量运转、肌肉收缩、ATP再生有直接关系的重要激酶，它可逆地催化肌酸与ATP之间的转磷酰基反应。CK测定的方法主要有肌酸显色法、酶偶联法，还有荧光法和生物发光法。肌酸激酶检测试剂盒常用的方法是肌酸显色法和酶偶联法。

反应原理
（1）肌酸显色法（比色法）
磷酸肌酸+ADP 

 肌酸　+　ATP
肌酸++α-萘酚 

 红色化合物(λ=540nm)
在一定范围内，红色深浅与肌酸量成正比，从而可求得血清中CK活性。在反应体系中加入Mg作激活剂；半胱氨酸供给巯基，保持CK活性中心必需基团不被氧化；和硫酸锌沉淀蛋白并中止反应。
（2）酶偶联法
磷酸肌酸+ADP 

 肌酸+ATP
ATP+葡萄糖 

 ADP+6-磷酸葡萄糖
6-磷酸葡萄糖+NADP 

 6-磷酸葡萄糖+NADPH
利用酶偶联反应原理连续监测NADP还原生成NADPH，后者引起340nm吸光度的增高。在340nm监测单位时间内NADPH的生成量(ΔA/min)，可计算出CK的活性浓度。 

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2. 计算方法

（1）酶偶联法

式中6220为NADPH在340nm的摩尔吸光度，2.30为反应液的总体积(ml)，0.10为血清用量(ml)。ΔA/min为平均每分钟的吸光度变化值。
（2）肌酸显色法（比色法）

样本要去
1. 空腹采血，采血前不宜做剧烈运动。
2. 可用干燥管、肝素抗凝管采血加塞送检。
3. 避免采用溶血、乳穈状样品。血液分离血清后2～8℃可稳定一周。
检测意义

1．正常参考值

(1) 肌酸显色法：8～60U/L(0.5～3.6U)。
(2) 酶偶联法：男24～195U/L，女24～170U/L。

2. 肌酸激酶临床意义

增高：
(1) 主要用心肌梗死诊断，CK升高幅度较AST和LDH都大，且出现早，2-4小时开始升高，12-48小时达到高峰，2-4天恢复到正常。尤其对心肌缺血和心内膜下心肌梗死的诊断比其他酶灵敏度高。故动态检测CK变化有助于观察病情和预后估计。
(2) 还见于进行性肌营养不良发作期、病毒性心肌炎、多发性心肌炎、肌肉损伤或手术后、脑血管疾病、酒精中毒、甲状腺功能减退、肺梗塞等。
减低：见于甲状腺功能亢进症

注意事项

1. 肌酸显色法

(1) 肌酐、精氨酸、胍乙酸等也可与α-萘酚及产生颜色反应。故肾功能衰竭患者应用自身血清做空白对照，以消除肌酐的影响。
(2) α-萘酚为白色或略带黄色之结晶，颜色过深，应在乙醇中重结晶后再用。
(3) Mg为激活剂，半胱氨酸提供巯基，和硫酸锌沉淀蛋白并中和反应。
(4) 血清CK活性>200U/L时，应用已知CK活性正常的血清稀释后重测，其结果乘以稀释倍数。

2. 酶偶联法

(1) 最好使用血清作标本，也可用肝素抗凝血浆，因CK活性不稳定，室温仅能稳定4h，4℃仅稳定8～12h，故标本采集后应尽快分离血清，及时测定。不能及时测定，应避光、低温保存。温度升高引起的酶失活为不可逆的。
(2) 红细胞内不含CK，轻度溶血无影响，但中、重度溶血可因红细胞内释放出的AK、ATP及G6P，使CK值假性升高。
(3) Mg、Ca、Mn对该酶有激活作用，Cl、So、Po、枸橼酸、氟化物可抑制其活性。