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- IP样品考染
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- 2025年07月16日
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北京百泰派克生物科技有限公司
- 服务名称：
IP样品考染
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IP样品考染即将免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP）拉下的蛋白样品电泳后进行考马斯亮蓝染色。在获得IP样品之后，质谱检测之前，一般需要将IP样品进行电泳预实验以评估其质量。通过十二烷基硫酸钠-聚bǐngxīxiānàn凝胶电泳（SDS-PAGE）及考马斯亮蓝染色（简称考染）预实验可评估IP样品蛋白量，从而评估该IP样品是否适用于质谱检测。若考染结果表明IP样品中蛋白量较高且差异明显，则可将该IP样品进行后续的质谱送样检测。否则应该优化和更改实验条件，重新制备样品后，再进行预实验验证并进行质谱检测。
考染的原理：考马斯亮蓝G-250染料在酸性溶液中可与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰的位置由465nm变为595nm，溶液的颜色也由棕黑色变为蓝色。由于吸光度值与蛋白浓度成正比，在595nm下测定的溶液的吸光度值并通过相应的数学计算即可得到样品中蛋白质的浓度。
IP样品考染过程主要包括染色和脱色两个步骤，首先制备考马斯亮蓝染色液和脱色液，之后需要分别进行考马斯亮蓝染色和脱色操作。
考马斯亮蓝染色液：称取1 g考马斯亮蓝R-250溶于400 mL ddH2O中，加入450 mL甲醇，100 mLbīngcùsuān，最后加ddH2O定容至1 L。
脱色液：甲醇100 mL，bīngcùsuān100 mL，ddH2O定容至1 L。
考马斯亮蓝染色和脱色：将电泳后的PAGE胶取下放在塑料盒中，加入适量考马斯亮蓝染色液进行染色，于室温摇床上慢慢摇动30 min（在染色过程中无需颜色过深，否则脱色反而费时）。之后将胶转移至脱色液中，在摇床上摇动5-10 min，弃去脱色液（此时蛋白条带应已可见），可换脱色液继续脱色至条带清晰。若要快速染色，可进行加热至沸腾，取出后置于室温摇床上慢慢摇动10 min即可。
百泰派克生物科技结合MALDI-TOF质谱系统与LC-MS/MS质谱系统，提供专业准确的蛋白胶点、胶条以及IP样品，CO-IP样品蛋白鉴定服务。可鉴定的样品包括但不限于：1D-SDS PAGE分离的蛋白胶条，2DE PAGE中的蛋白胶点，蛋白表达产物，免疫共沉淀（Co-IP）样品。只需要将您的实验目的告诉我们并寄送样品，百泰派克生物科技将会负责完成样品处理、上机分析、数据分析、项目报告等项目后续服务。
其他服务项目
优质检测平台
（1）基于生物化学、分子生物学、色谱的检测分析平台
该平台配备了Agilent 2100 生物分析仪、ProteinSimple凝胶成像系统、高效液相色谱系统，为蛋白质组学、代谢组学分析保驾护航，包括样品制备、分离纯化分子量测量、杂质表征表达研究等:
（2）基于质谱技术的蛋白质组学分析平台、代谢组学分析平台、蛋白测序平台
该平台配备了超高效液相色谱质谱联用，Orbitrap Fusion Lumos Tribri,Thermo Scientific Exploris以及氢气交换质谱仪配合机械臂为蛋白贡组学、代谢组学和蛋白测序提供了全面的分析手段，包括蛋白质和代谢物的分离、质谱分析、结构分析以及动态信息研究;
（3）生物药物表征平台
该平台配备了DSC-FTRR差示扫描量热仪与傅立叶变换拉曼光谱仪，氢气交换质谱仪配备机械臂，为生物药物表征提供了全面的分析手段，包括生物药物的分离、纯化、结构分析和动态信息研究:
（4）基于10x Genomics的单细胞分析平台
该平台能够完成基于10x Genomics单细胞分析平台的检测流程包括单细胞分选、cDNA合成、文库制备、文库质量检测、PCR扩增以及高通量测序;
（5）基于Fluidigm的单细胞质谱流式检测平台
采用基于Fluidigm Helios流式细胞仪(Mass Cytometry Systemfor Single Cell Analysis)用于单细胞质谱分析，该平台能够完成包括单细胞捕获、cDNA合成、实时定量PCR分析、目标区域扩增以及质谱流式细胞分析;
（6）基于高精度质谱的免疫多肽组学及免疫学检测平台
基于高精度质谱的免疫多肽组学及免疫学检测平台，能够完成包括多肽分离、纯化、合成、质谱分析、免疫学检测以及分子相互作用研究;
（7）生信云平台
基于生物信息分析方法的生信云平台，能够完成一整套的生物信息学解决方案，包括组学数据的质量分析、差异表达分析、差异表达物GO、KEGG、COG注释分析、聚类分析、相互作用网络等多层次网络和通路的分析。
百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商
北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。
1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；
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文献和实验在 WB 和 IP 实验中，破碎细胞或组织与选择和配制裂解液一样重要。比起一些更软的组织（如脑组织），在准备 WB 或 IP 的样品时，紧密的纤维组织（如肌肉组织）需要更剧烈的方法；对于培养的原代细胞或细胞系，在准备 WB 和 IP 的样品时需要一定的机械搅拌去提取蛋白。机械破碎样品常规的方法和设备如下：组织高速匀浆仪通常破碎体积大的植物或者动物组织需要用可旋转、带有刀片的匀浆仪或者搅拌器 .这些仪器通常通过一个电动的马达带动不锈钢可旋转切割刀片，可以从顶部或者底部启动，这个过程中产生很少热量
原核表达蛋白纯化② 真核表达蛋白抽提2. 体系孵育与 pull-down3. 考染检测与 WB 验证四、GST pull-down 结果1. GST pull-down 结果分析① 考马斯亮蓝检测② Western blot 验证五、GST pull-down 拓展1. GST pull-down 与 Co-IP 区别① GST pull-down② Co-IPGST pull-down 与 Co-IP 区别：GST pull-down 是原核纯化蛋白与真核蛋白在试管内发生生化反应互作的结果
。 3. 推荐优选柱式法进行蛋白样品提取 解决蛋白样品粘稠的最佳方式是改变蛋白质的制备方式，可以选择新一代柱式蛋白提取法替代传统的裂解液法。柱式法通过使用优化的裂解液配方，可有效提高裂解液对样品的裂解效率，特别是可以提升难溶蛋白的溶解效率。同时配合使用离心管柱技术有效阻截核酸，让蛋白溶液瞬间澄清无粘稠物产生，无需复杂操作，即可获得高质量无丢失的蛋白样品。 测试实例：裂解液法 VS 柱式法 同种样品分别使用裂解液法和柱式法进行 WB 样品制备，SDS-PAGE 电泳后考染如图
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