赛默飞世尔Thermo Fisher MCILVAINE B

一篇搞定 IP、co-IP 实验

液，比如 RIPA，虽然裂解剧烈，但是无法维持蛋白天然构象，会破坏互作蛋白对。 如果自配，建议采用温和系统，比如 NP40/Triton 0.1%-1%；SDS ≤0.1%，盐离子≤150 mM 记得要加蛋白酶和/或磷酸酶抑制剂 结合液---利于蛋白之间的相互结合，要考虑孵育（结合）顺序 如果抗体和 beads 先孵育，建议 选择 pH 8.2（更常用）或者 pH 5.0 如果选用纯抗原作为诱饵蛋白 X 去拉裂解液中的靶蛋白 Y，抗体和抗原的结合 buffer 选择中性PBS/TBS 如果诱饵蛋白 X

Combined 3C-ChIP-Cloning (6C) Assay: A Tool to Unravel Protein-Mediated Genome Architecture

; Fisher BP333) T4 DNA ligase (400 U/µL) TE buffer (pH 8.0) Dilute 10X stock to 1X before use. Triton X-100 (20% v/v; VWR) Trypsin (1X; Invitrogen 25300) Equipment Aluminum foil Cell scraper Centrifuge

Purification of mAb (IgG)

7.8 or Binding Buffer.(6) BD tubing 14-170-12F (Fisher).(7) Polyethylene tubing Clay Adanes.(8) 18 Gauge needles.(9) Binding Buffer (BioRad): make 1L. 314g/L ddH2O and filter through 0.22 um, filter. pH=9.0.(10) Elution buffer (BioRad): make 500 ml. 11g/500 ml