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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
at-20℃
- 英文名：
pLV2-U6-ATG5-shRNA3-EGFP-Puro
- 库存：
现货
- 供应商：
上海圻明
- 规格：
0.5-2ug
上海圻明生物优势供应植物系列、大肠杆菌系列、酵母系列、细胞病毒等质粒载体。公司可根据客户需求构建质粒载体。
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文献和实验AAV 三保一是什么？shRNA 体内敲低一次保一条有效靶点
靶点对比 设计要点 做法 为什么 多靶点并行 单基因设计 3 条独立 shRNA 覆盖单靶点的随机失效 区域分散 分别靶向 CDS / 3'UTR 等不同区段 避免 mRNA 折叠致全部失效 GC 适中 推荐 35%–55% 范围 平衡稳定性与特异性、优化加工 脱靶低 避开基因组同源区域 保证干扰特异性 载体适配 U6 Pol Ⅲ 驱动，经典 GV478 载体（U6-MCS-CAG-EGFP） 高效转录、被 Dicer 加工 判定标准 RT-qPCR ΔCt
. Moreover, to improve the constructing and screening efficiency for the shRNA-expression recombinant clones, these four DNA vectors are further reconstructed by inserting a stuffer of puromycin resistance gene (Puro R ) between restriction enzyme Cla I and Hind III
：pCas9/gRNA1 载体本身不带筛选标签。我们用带有嘌呤霉素和 EGFP 标签的载体 pLV-EGFP（2A)puro 和 pCas9/gRNA1 载体共转染，再用嘌呤霉素筛选转染成功的细胞。 简要步骤 设计靶点→构建 pCas9/gRNA1 载体→pTYNE 验证靶点→pCas9/gRNA1 载体转染 293T 细胞→挑选培养细胞克隆→测序验证基因敲除 靶点设计和基因敲除载体构建 人 TP53 基因有多个 mRNA 和蛋白拷贝，2 个转录起始位点，以及多个
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