Recombinant Human M6PR cation

重组蛋白的制备涉及多个步骤，包括基因克隆、表达系统选择和蛋白纯化：
● 基因克隆：基因克隆是将目标基因导入表达载体中的过程。研究人员可以选择不同的克隆方法，如限制性酶切克隆、PCR扩增克隆等，根据需要构建目标基因的DNA序列。
● 表达系统选择：选择适合的表达系统是重组蛋白制备的关键一步。常用的表达系统包括大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞。每种表达系统都具有不同的优缺点，适用于不同类型的蛋白质表达。
5大蛋白表达系统：
规格表达、纯化、复性和定量，具体步骤如下：
一、重组蛋白质的诱导表达
1. 挑取转化有质粒的单菌落， 接种于 3ml 选择性 LB 液体培养基中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养过夜。
2. 次日将培养过夜的菌液 500 μl 再接种于 10ml（1:20）选择性 LB 液体培养基 中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养至光密度（OD600=0.6）时，取 1 ml 样本作 为诱导前标本， 10000g 离心 1min 收集菌体沉淀，－20 oC 冻存备用。
3. 加入 1 mol/L IPTG 于菌液中，使 IPTG 终浓度为 1 mM ，37 oC ，250 rpm/min 振摇培养 4 ～ 5 小时。取 1 ml 样本作为诱导后标本，同上法收集菌体沉淀， -20 oC 冻存备用。
4. 将诱导前后菌体沉淀用 20 ~ 40 μl PBS（pH= 8.0）重悬， 加入等体积的 2×SDS 上样缓冲液， 煮沸加热 5min，SDS 凝胶（SDS-PAGE）电泳分离 ， 考马斯亮蓝染色 3 小时后，脱色观察结果。
5. 选取诱导成功的细菌克隆，扩大诱导规模，收集菌体沉淀，于－ 20 oC 保存，准备做下一步分析及纯化。

二、重组蛋白质的分离纯化
重组蛋白质的可溶性鉴定
1. 将按上法诱导培养后收集的菌体重悬于裂解液 1 (Lysis buffer under native conditions )中，然后在－80 oC 低温冰箱中放置 10 min。
2. 冰中解冻。
3. 在冰浴上用超声破碎仪破菌 6 次， 每次 10 sec，间歇 10 sec，电压 200-300 V。
4. 10000g，4oC，离心 20min，取上清（为溶液 A）， － 20 oC 保存； 另将沉淀用 同样裂解液 1 溶解（为溶液 B），同样 －20 oC 保存，供后继分析使用。
5. 将上述 A、B 溶液和诱导前后的细菌进行 SDS-PAGE 电泳， 考马斯亮蓝染色， 比较分析重组蛋白质的溶解性。如果诱导表达的蛋白质位于 A 溶液中， 则为
可溶性蛋白；如果是在 B 溶液中，则为非可溶蛋白。
公司正在出售的产品：
C57BL/6小鼠脂肪间质干细胞完全培养基C57BL/6mouseadiposemesenchymalstemcellsculturemedium    SERPING1 Protein Human  SerpinG1 / C1 inhibitor / C1IN 蛋白 (His 标签)
疱肉牛肉粒 100g 加入疱肉基础中，配成疱肉培养基    LON PROTEASE Protein E. coli 重组大肠杆菌 Lon protease 蛋白 (His 标签)
StuartTransportMedium    TNFRSF10B TRAIL R2 / CD262 / TNFRSF10B 蛋白 (His & Fc 标签) Protein
PALCAM Listeria selective-Supplement acc.to van Netten et al PALCAM 1.12122.0001 MERCK默克 incubation media PALCAM Listeria selective-Supplement acc.to van Netten et al PALCAM 1.12122.0001 MERCK默克    信号素4B(SEMA4B)重组蛋白 Recombinant Semaphorin 4B (SEMA4B)
Bolton肉汤基础 250g 用于空肠弯曲菌的选择性增菌(GB)，每100mL基础培养基需添加1支配套试剂(SR0340)    NLGN4X NLGN4X 蛋白 (His 标签) Protein
Caco-2人结肠癌上皮细胞完全培养基Caco-2humancoloncancerepithelialcellmedium    SERPINI1 Protein Human  SerpinI1 / Neuroserpin 蛋白 (His 标签)
LactoseBileMedium    HA Protein H5N1 重组甲型流感 H5N1 (A/VietNam/1203/2004) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His & Fc 标签)
产毒培养基250g用于青霉,曲霉的产毒培养    TNFRSF14 HVEM / TNFRSF14 蛋白 (His & Fc 标签) Protein
DFI琼脂(阪崎肠杆菌显色培养基) 200g/瓶 incubation media DFI琼脂(阪崎肠杆菌显色培养基) 200g/瓶    骨钙素(OC)重组蛋白 Recombinant Osteocalcin (OC)
亮绿乳糖培养基 Brilliant Green Lactose Medium 250克 饮用天然矿泉水中大肠杆菌检验    CHN1 CHN1 / Chimerin 1 蛋白 Protein
Recombinant Human M6PR cation dependentCampy-Cefex琼脂基础250用于弯曲杆菌分离培养(FDA方法)incubationmediaCampy-Cefex琼脂基础250用于弯曲杆菌分离培养(FDA方法)    SERPINI2 Protein Human  SerpinI2 蛋白 (His 标签)
HalophilicBacteriaSelectiveAgar    ERBB2 Protein Canine 重组狗 HER2 / ErbB2 蛋白 (His 标签)
FS培养基250g用于梭杆菌的选择性增菌培养    WISP1 CCN4 / WISP1 蛋白 (His 标签) Protein
重组蛋白质为非可溶性蛋白（ 变性条件下）的分离纯化
1. 将菌体沉淀溶于适量裂解液 2（Lysis buffer under denaturing conditions ）中，室温下搅拌和吹打沉淀，避免泡沫生成。
2. 10000g ，4 oC，离心 30 min，收集上清液。
3. 将 Ni-NTAAgarose 充填柱子，并连接于 Pharmarcia 低压液相层析系统，用 5 倍柱体积的裂解液 2 平衡 Ni-NTAAgarose，调节 A280 值至零线。
4. 将适量上清液上样到 Ni-NTAAgarose 柱子中， 并用 lysis buffer 冲洗至 A280 值低于 0.01。
5. 分别用 5 ～ 10 倍柱体积的清洗液 1 和清洗液 2（Washbuffer 1 and 2）清洗柱 子，直至 A280 值低于 0.01。
6. 用洗脱液（Elution buffer）洗脱重组蛋白质， 在 A280 值监测下，收集出现峰 线后含有重组蛋白的所有洗脱液。