Recombinant Human ICEBERG

重组蛋白的制备涉及多个步骤，包括基因克隆、表达系统选择和蛋白纯化：
● 基因克隆：基因克隆是将目标基因导入表达载体中的过程。研究人员可以选择不同的克隆方法，如限制性酶切克隆、PCR扩增克隆等，根据需要构建目标基因的DNA序列。
● 表达系统选择：选择适合的表达系统是重组蛋白制备的关键一步。常用的表达系统包括大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞。每种表达系统都具有不同的优缺点，适用于不同类型的蛋白质表达。
5大蛋白表达系统：
商品属性：

货号	XG-DB2306	种属	Human
宿主	E.Coli	表达区间	1-90
分子量	9.8 kDa	标签	N-terminal His Tag
规格	50μg、200ug、1mg	用途	仅供科研实验

商品介绍：

别称：CAR18_HUMAN, CARD18, Caspase 1 inhibitor Iceberg, Caspase recruitment domain family member 18, Caspase recruitment domain-containing protein 18, Caspase-1 inhibitor Iceberg, ICEBERG caspase 1 inhibitor, Pseudo ICE, UNQ5804, UNQ5804/PRO19611  纯度 Greater than 95% as determined by SDS-PAGE 应用  Western Blot, ELISA 性状  Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4 溶解方法Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex 存储 -20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution

表达、纯化、复性和定量，具体步骤如下：
一、重组蛋白质的诱导表达
1. 挑取转化有质粒的单菌落， 接种于 3ml 选择性 LB 液体培养基中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养过夜。
2. 次日将培养过夜的菌液 500 μl 再接种于 10ml（1:20）选择性 LB 液体培养基 中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养至光密度（OD600=0.6）时，取 1 ml 样本作 为诱导前标本， 10000g 离心 1min 收集菌体沉淀，－20 oC 冻存备用。
3. 加入 1 mol/L IPTG 于菌液中，使 IPTG 终浓度为 1 mM ，37 oC ，250 rpm/min 振摇培养 4 ～ 5 小时。取 1 ml 样本作为诱导后标本，同上法收集菌体沉淀， -20 oC 冻存备用。
4. 将诱导前后菌体沉淀用 20 ~ 40 μl PBS（pH= 8.0）重悬， 加入等体积的 2×SDS 上样缓冲液， 煮沸加热 5min，SDS 凝胶（SDS-PAGE）电泳分离 ， 考马斯亮蓝染色 3 小时后，脱色观察结果。
5. 选取诱导成功的细菌克隆，扩大诱导规模，收集菌体沉淀，于－ 20 oC 保存，准备做下一步分析及纯化。

二、重组蛋白质的分离纯化
重组蛋白质的可溶性鉴定
1. 将按上法诱导培养后收集的菌体重悬于裂解液 1 (Lysis buffer under native conditions )中，然后在－80 oC 低温冰箱中放置 10 min。
2. 冰中解冻。
3. 在冰浴上用超声破碎仪破菌 6 次， 每次 10 sec，间歇 10 sec，电压 200-300 V。
4. 10000g，4oC，离心 20min，取上清（为溶液 A）， － 20 oC 保存； 另将沉淀用 同样裂解液 1 溶解（为溶液 B），同样 －20 oC 保存，供后继分析使用。
5. 将上述 A、B 溶液和诱导前后的细菌进行 SDS-PAGE 电泳， 考马斯亮蓝染色， 比较分析重组蛋白质的溶解性。如果诱导表达的蛋白质位于 A 溶液中， 则为
可溶性蛋白；如果是在 B 溶液中，则为非可溶蛋白。
公司正在出售的产品：
三糖铁琼脂 根据葡萄糖、乳糖和蔗糖的发酵及的产生、鉴定革兰氏阴性菌 500g incubation media 三糖铁琼脂 根据葡萄糖、乳糖和蔗糖的发酵及的产生、鉴定革兰氏阴性菌 500g    Defensin Beta2/beta-defensin 2/BD-2(rat 0.5mgDefensin Beta2/beta-defensin 2/BD-2(rat) 防御素β2抗原(大鼠)
白球拟酵母 支/瓶    HRAS HRAS / GTPase Hras 蛋白 (His 标签) Protein
LB肉汤300ml/袋*基因工程菌大肠杆菌培养    TYRP1 Protein Human  TRP1 / TYRP1 蛋白 (His 标签)
HCAgar,Modified    ACP5 Protein Mouse  ACP5 / TRAP 蛋白 (His 标签)
改良的McBride琼脂MMA26030250g用于单核细胞增生李斯特氏菌的选择性分离培养(GB/T4789.30-2003，SN03)。    CDH8 Cadherin-8 / CDH8 蛋白 Protein
赖氨酸铁琼脂 (CM0381) Oxoid incubation media 赖氨酸铁琼脂 (CM0381) Oxoid    Deltex-1 (DTX1 0.5mgDeltex-1 (DTX1) (Deltex protein 1)抗原
嗜肺军团菌 produces lactic acid lactate 支/瓶    HSPA8 HSPA8 / HSC70 蛋白 (His 标签) Protein
LB营养琼脂250g用于分子生物学中大肠杆菌的培养    TYRP1 Protein Human  TRP1 / TYRP1 蛋白 (His 标签)
AgarmediumN(Cetrimideagar)    FGF18 Protein Mouse  FGF18 / FGF-18 蛋白 (His 标签)
MUGNutrientAgar    DDR2 DDR2 Kinase / CD167b 蛋白 (Fc 标签) Protein
Recombinant Human ICEBERG厌氧菌琼脂 Anaerobic Agar 用于厌氧菌的分离培养    FLIP S/L peptide 凋亡调节基因之一(多肽抗原 0.5mgFLIP S/L peptide 凋亡调节基因之一(多肽抗原)
WORT肉汤 WORT Broth 250克 真菌和酵母菌的培养    EPHA4 EphA4 蛋白 (His & Fc 标签) Protein
重组蛋白质为非可溶性蛋白（ 变性条件下）的分离纯化
1. 将菌体沉淀溶于适量裂解液 2（Lysis buffer under denaturing conditions ）中，室温下搅拌和吹打沉淀，避免泡沫生成。
2. 10000g ，4 oC，离心 30 min，收集上清液。
3. 将 Ni-NTAAgarose 充填柱子，并连接于 Pharmarcia 低压液相层析系统，用 5 倍柱体积的裂解液 2 平衡 Ni-NTAAgarose，调节 A280 值至零线。
4. 将适量上清液上样到 Ni-NTAAgarose 柱子中， 并用 lysis buffer 冲洗至 A280 值低于 0.01。
5. 分别用 5 ～ 10 倍柱体积的清洗液 1 和清洗液 2（Washbuffer 1 and 2）清洗柱 子，直至 A280 值低于 0.01。
6. 用洗脱液（Elution buffer）洗脱重组蛋白质， 在 A280 值监测下，收集出现峰 线后含有重组蛋白的所有洗脱液。
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