Recombinant Human EGR1

商品属性：

货号	XG-DB1859	种属	Human
宿主	E.Coli	表达区间	1-246
分子量	45.5 kDa	标签	N-terminal His-IF2DI Tag
规格	50μg、200ug、1mg	用途	仅供科研实验

商品介绍：

别称：AT225, Early growth response 1, Early growth response protein 1, EGR 1, EGR-1, EGR1, EGR1_HUMAN, G0S30, KROX 24, KROX24, Nerve growth factor-induced clone A, Nerve growth factor-induced protein A, NGFI-A, NGFIA, TIS8, Transcription factor ETR103, Transcription factor Zif268, ZIF 268, ZIF268, Zinc finger protein 225, Zinc finger protein Krox-24, ZNF225  纯度 Greater than 90% as determined by SDS-PAGE 应用  Western Blot, ELISA 性状  Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4 溶解方法Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex 存储 -20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution

重组蛋白的制备涉及多个步骤，包括基因克隆、表达系统选择和蛋白纯化：
● 基因克隆：基因克隆是将目标基因导入表达载体中的过程。研究人员可以选择不同的克隆方法，如限制性酶切克隆、PCR扩增克隆等，根据需要构建目标基因的DNA序列。
● 表达系统选择：选择适合的表达系统是重组蛋白制备的关键一步。常用的表达系统包括大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞。每种表达系统都具有不同的优缺点，适用于不同类型的蛋白质表达。
5大蛋白表达系统：

表达、纯化、复性和定量，具体步骤如下：
一、重组蛋白质的诱导表达
1. 挑取转化有质粒的单菌落， 接种于 3ml 选择性 LB 液体培养基中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养过夜。
2. 次日将培养过夜的菌液 500 μl 再接种于 10ml（1:20）选择性 LB 液体培养基 中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养至光密度（OD600=0.6）时，取 1 ml 样本作 为诱导前标本， 10000g 离心 1min 收集菌体沉淀，－20 oC 冻存备用。
3. 加入 1 mol/L IPTG 于菌液中，使 IPTG 终浓度为 1 mM ，37 oC ，250 rpm/min 振摇培养 4 ～ 5 小时。取 1 ml 样本作为诱导后标本，同上法收集菌体沉淀， -20 oC 冻存备用。
4. 将诱导前后菌体沉淀用 20 ~ 40 μl PBS（pH= 8.0）重悬， 加入等体积的 2×SDS 上样缓冲液， 煮沸加热 5min，SDS 凝胶（SDS-PAGE）电泳分离 ， 考马斯亮蓝染色 3 小时后，脱色观察结果。
5. 选取诱导成功的细菌克隆，扩大诱导规模，收集菌体沉淀，于－ 20 oC 保存，准备做下一步分析及纯化。

二、重组蛋白质的分离纯化
重组蛋白质的可溶性鉴定
1. 将按上法诱导培养后收集的菌体重悬于裂解液 1 (Lysis buffer under native conditions )中，然后在－80 oC 低温冰箱中放置 10 min。
2. 冰中解冻。
3. 在冰浴上用超声破碎仪破菌 6 次， 每次 10 sec，间歇 10 sec，电压 200-300 V。
4. 10000g，4oC，离心 20min，取上清（为溶液 A）， － 20 oC 保存； 另将沉淀用 同样裂解液 1 溶解（为溶液 B），同样 －20 oC 保存，供后继分析使用。
5. 将上述 A、B 溶液和诱导前后的细菌进行 SDS-PAGE 电泳， 考马斯亮蓝染色， 比较分析重组蛋白质的溶解性。如果诱导表达的蛋白质位于 A 溶液中， 则为
可溶性蛋白；如果是在 B 溶液中，则为非可溶蛋白。
重组蛋白质为非可溶性蛋白（ 变性条件下）的分离纯化
1. 将菌体沉淀溶于适量裂解液 2（Lysis buffer under denaturing conditions ）中，室温下搅拌和吹打沉淀，避免泡沫生成。
2. 10000g ，4 oC，离心 30 min，收集上清液。
3. 将 Ni-NTAAgarose 充填柱子，并连接于 Pharmarcia 低压液相层析系统，用 5 倍柱体积的裂解液 2 平衡 Ni-NTAAgarose，调节 A280 值至零线。
4. 将适量上清液上样到 Ni-NTAAgarose 柱子中， 并用 lysis buffer 冲洗至 A280 值低于 0.01。
5. 分别用 5 ～ 10 倍柱体积的清洗液 1 和清洗液 2（Washbuffer 1 and 2）清洗柱 子，直至 A280 值低于 0.01。
6. 用洗脱液（Elution buffer）洗脱重组蛋白质， 在 A280 值监测下，收集出现峰 线后含有重组蛋白的所有洗脱液。
公司正在出售的产品：
改良番茄汁琼脂培养基基础 250g 用于乳酸菌饮料中乳酸菌的菌落计数    NA重组甲型流感 H9N2 (A/Chicken/Hong Kong/G9/97) 神经氨酸酶 (Neuraminidase / NA) (His 标签) Protein
SD大鼠脂肪间质干细胞完全培养基SDratadiposemesenchymalstemcellsculturemedium    CNTN2 Protein Human  Contactin 2 / CNTN2 蛋白 (His 标签)
伊红美蓝琼脂(颗粒) 250g 弱选择性培养基，用于肠道菌的选择性分离    SETD8 SETD8 / PR-Set7 蛋白 Protein
MiddleBrook7H250g用于分枝杆菌的分离培养    胰岛素样生长因子结合蛋白1(IGFBP1)重组蛋白 Recombinant Insulin Like Growth Factor Binding Protein 1 (IGFBP1)
Listeria selective enrichment supplement acc.to FDA-BAM 1992 1.11883.0500 MERCK默克 incubation media Listeria selective enrichment supplement acc.to FDA-BAM 1992 1.11883.0500 MERCK默克    BIRC2 Protein Human  cIAP1 / HIAP2 蛋白 (AVI 标签)
琼脂 250g 用于菌的选择性分离培养。    SCARB2 LIMP-2 / SCARB2 / CD36L2 蛋白 (His & Fc 标签) Protein
SD胎鼠海马神经元完全培养基ThehippocampalneuronsofSDfetalratswithcompletemedium    SSPA Protein E. coli 重组大肠杆菌 ssPA / Stringent starvation protein A 蛋白 (His 标签)
液体沙氏培养基 250g 用于真菌和酵母菌增菌    HA重组甲型流感 H1N1 (A/New Caledonia/20/1999) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 标签) Protein
MiddleBrook7Har    NF-M (Neurofilament triplet M 0.5mgNF-M (Neurofilament triplet M) 中分子量神经丝蛋白(抗原)
Recombinant Human EGR1李斯特氏菌选择富集添加剂 incubation media 李斯特氏菌选择富集添加剂    BIRC5 Protein Human  Survivin / BIRC5 / API4 蛋白
TCBS琼脂 250g 用于肠道致病性弧菌特别是菌和副溶血性弧菌的选择性分离培养(GB/T 4789.7-2008，SN0173-20...    IL10重组野猪 IL10 / Interleukin-10 蛋白 Protein
SD胎鼠皮层神经元完全培养基CorticalneuronsofSDfetalratscompletemedium    CDC37 Protein Mouse  CDC37 / CDC37A 蛋白
LiquidSabourandMedium    IDO1 IDO1 / IDO 蛋白 (His 标签) Protein