Recombinant Human DR1

重组蛋白的制备涉及多个步骤，包括基因克隆、表达系统选择和蛋白纯化：
● 基因克隆：基因克隆是将目标基因导入表达载体中的过程。研究人员可以选择不同的克隆方法，如限制性酶切克隆、PCR扩增克隆等，根据需要构建目标基因的DNA序列。
● 表达系统选择：选择适合的表达系统是重组蛋白制备的关键一步。常用的表达系统包括大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞。每种表达系统都具有不同的优缺点，适用于不同类型的蛋白质表达。
5大蛋白表达系统：
商品属性：

货号	XG-DB1806	种属	Human
宿主	E.Coli	表达区间	1-176
分子量	19.3 kDa	标签	N-terminal His Tag
规格	50μg、200ug、1mg	用途	仅供科研实验

商品介绍：

别称：Down regulator of transcription 1, Down regulator of transcription 1 TBP binding, Down-regulator of transcription 1, down-regulator of transcription 1, TBP-binding (negative cofactor 2), DR 1, Dr1, Dr1 protein, NC 2, NC2, NC2 beta, NC2-beta, NC2B_HUMAN, Negative co factor 2, Negative cofactor 2, Negative cofactor 2 beta, Negative cofactor 2-beta, Protein Dr1  纯度 Greater than 95% as determined by SDS-PAGE 应用  Western Blot, ELISA 性状  Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4 溶解方法Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex 存储 -20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution

表达、纯化、复性和定量，具体步骤如下：
一、重组蛋白质的诱导表达
1. 挑取转化有质粒的单菌落， 接种于 3ml 选择性 LB 液体培养基中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养过夜。
2. 次日将培养过夜的菌液 500 μl 再接种于 10ml（1:20）选择性 LB 液体培养基 中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养至光密度（OD600=0.6）时，取 1 ml 样本作 为诱导前标本， 10000g 离心 1min 收集菌体沉淀，－20 oC 冻存备用。
3. 加入 1 mol/L IPTG 于菌液中，使 IPTG 终浓度为 1 mM ，37 oC ，250 rpm/min 振摇培养 4 ～ 5 小时。取 1 ml 样本作为诱导后标本，同上法收集菌体沉淀， -20 oC 冻存备用。
4. 将诱导前后菌体沉淀用 20 ~ 40 μl PBS（pH= 8.0）重悬， 加入等体积的 2×SDS 上样缓冲液， 煮沸加热 5min，SDS 凝胶（SDS-PAGE）电泳分离 ， 考马斯亮蓝染色 3 小时后，脱色观察结果。
5. 选取诱导成功的细菌克隆，扩大诱导规模，收集菌体沉淀，于－ 20 oC 保存，准备做下一步分析及纯化。

二、重组蛋白质的分离纯化
重组蛋白质的可溶性鉴定
1. 将按上法诱导培养后收集的菌体重悬于裂解液 1 (Lysis buffer under native conditions )中，然后在－80 oC 低温冰箱中放置 10 min。
2. 冰中解冻。
3. 在冰浴上用超声破碎仪破菌 6 次， 每次 10 sec，间歇 10 sec，电压 200-300 V。
4. 10000g，4oC，离心 20min，取上清（为溶液 A）， － 20 oC 保存； 另将沉淀用 同样裂解液 1 溶解（为溶液 B），同样 －20 oC 保存，供后继分析使用。
5. 将上述 A、B 溶液和诱导前后的细菌进行 SDS-PAGE 电泳， 考马斯亮蓝染色， 比较分析重组蛋白质的溶解性。如果诱导表达的蛋白质位于 A 溶液中， 则为
可溶性蛋白；如果是在 B 溶液中，则为非可溶蛋白。
公司正在出售的产品：
Littman琼脂250g用于真菌的分离培养    丝氨酸蛋白酶23(PRSS23)重组蛋白 Recombinant Protease, Serine 23 (PRSS23)
强化梭菌鉴别培养基 250(g) incubation media 强化梭菌鉴别培养基 250(g)    CA10 Protein Human  Carbonic Anhydrase X / CA10 蛋白 (His 标签)
结核冷染液 结核冷染液 70毫升×3    IL1RAPL2 IL-1R9 / IL1RAPL2 蛋白 (Fc 标签) Protein
TBB培养基250用于乳酪产品中梭菌的计数(Merck方法)incubationmediaTBB培养基250用于乳酪产品中梭菌的计数(Merck方法)    HA Protein H10N3 重组甲型流感 H10N3 (A/duck/Hong Kong/786/1979) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 标签)
3%NaClTrypticSoyAgar    FZD10 Frizzled-10 / FZD10 蛋白 (Fc 标签) Protein
酸性肉汤250g用于酸性缺罐头食品商业无菌检验    激肽释放酶10(KLK10)重组蛋白 Recombinant Kallikrein 10 (KLK10)
Fraser培养基 Fraser Medium 用于李氏菌的增菌培养    CA13 Protein Human  Carbonic Anhydrase XIII / CA13 蛋白 (His 标签)
产芽孢肉汤 Sporulation Broth 250克 产气荚膜梭菌的产芽孢培养    CTSH Cathepsin H / CTSH 蛋白 (His 标签) Protein
TBX培养基l用于快速、准确检测大肠杆菌大肠杆菌培养24小时，显兰色incubationmediaTBX培养基l用于快速、准确检测大肠杆菌大肠杆菌培养24小时，显兰色    CA9 Protein Canine 重组狗 Carbonic Anhydrase IX / CA9 蛋白 (His 标签)
Recombinant Human DR1MEIMedium    TMUB2 TMUB2 蛋白 (His 标签) Protein
DextroseSemisolidMedium    激素敏感性脂肪酶(LIPE)重组蛋白 Recombinant Lipase, Hormone Sensitive (LIPE)
AHM鉴别培养基 250g 用于致病性嗜水气单胞菌的鉴别    CA2 Protein Human  Carbonic Anhydrase II / CA2 蛋白 (His 标签)
马铃薯葡萄糖琼脂 (PDA) Potato Dextrose Agar 250 用于霉菌、酵母菌计数(GB标准)    S100A4 S100A4 蛋白 Protein
重组蛋白质为非可溶性蛋白（ 变性条件下）的分离纯化
1. 将菌体沉淀溶于适量裂解液 2（Lysis buffer under denaturing conditions ）中，室温下搅拌和吹打沉淀，避免泡沫生成。
2. 10000g ，4 oC，离心 30 min，收集上清液。
3. 将 Ni-NTAAgarose 充填柱子，并连接于 Pharmarcia 低压液相层析系统，用 5 倍柱体积的裂解液 2 平衡 Ni-NTAAgarose，调节 A280 值至零线。
4. 将适量上清液上样到 Ni-NTAAgarose 柱子中， 并用 lysis buffer 冲洗至 A280 值低于 0.01。
5. 分别用 5 ～ 10 倍柱体积的清洗液 1 和清洗液 2（Washbuffer 1 and 2）清洗柱 子，直至 A280 值低于 0.01。
6. 用洗脱液（Elution buffer）洗脱重组蛋白质， 在 A280 值监测下，收集出现峰 线后含有重组蛋白的所有洗脱液。
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