Edman化学降解的原理和反应特点

Edman降解法（Edman degradation method）是由菲尔•埃德曼（Pehr Edman）首先创立，用于肽链或蛋白质N-末端氨基酸序列分析的常用方法，其反应原理和反应特点如下所述。

 

Edman降解法原理是yìliúqíngsuānběnzhǐ（PITC）在弱碱（TMA）条件下与蛋白质N端的α-氨基偶联生成苯氨基硫甲酰肽（PTC-AA），然后在无水强酸（TFA）条件下，N端的第一个残基从完整的多肽蛋白链上以2-苯氨基噻唑啉酮（ATZ-AA）的形式裂解下来。之后在稀酸条件下，ATZ-AA转化为更加稳定的苯基乙内酰硫N脲衍生物，即PTH-AA，产生的PTH-AA输送至高效液相色谱中进行分析鉴定出氨基酸类别。重复上述氨基酸鉴定反应以达到对N端氨基酸按照从N端到C端的方向依次对氨基酸序列进行分析。对于序列较长的蛋白质（多肽），还可以将样品先切成小的肽段，先对肽段序列分析，再将肽段信息进行拼接即可获得完整蛋白质的序列信息。

 

Edman降解法采用标记试剂苯异硫氰酸（PITC），优点是不会破坏余下的多肽链，可重复进行。Edman降解法N端测序可以直接分析蛋白质多肽样品的N端序列，不需要借助蛋白数据库（发生N端突变或者经改造过的蛋白也不例外）。因此，可用于对全新的没有数据库信息的蛋白质多肽进行N端序列分析。同时，该方法样品用量少（仅需50-100pmol），灵敏度高，结果更加准确。因此，采用经典的Edman降解法进行N端序列分析在学术研究上较为普遍。然而，当N末端经过化学修饰或遇到非α-氨基酸时，则无法使用Edman降解法测序；Edman降解法具有通量较低（一般对蛋白质N端50个左右氨基酸序列进行测定）且无法对多个蛋白质进行同时分析的缺点。

 

百泰派克生物科技采用岛津公司Edman测序系统，为广大科研工作者和科研客户提供基于Edman降解的蛋白质N端测序服务。采用我们的测序系统，可以测定N端30个氨基酸的序列信息。采用特定的蛋白上样系统，可以测定N端的60-70个氨基酸。百泰派克生物科技也建立了以先进的LC-MS/MS技术进行N-端测序的平台，可以测出封闭和修饰的蛋白质末端，与基于Edman降解的蛋白质N端测序形成互补，保证N端测序服务的顺利进行。

 

其他服务项目

 

优质检测平台

（1）基于生物化学、分子生物学、色谱的检测分析平台

该平台配备了Agilent 2100 生物分析仪、ProteinSimple凝胶成像系统、高效液相色谱系统，为蛋白质组学、代谢组学分析保驾护航，包括样品制备、分离纯化分子量测量、杂质表征表达研究等:

（2）基于质谱技术的蛋白质组学分析平台、代谢组学分析平台、蛋白测序平台

该平台配备了超高效液相色谱质谱联用，Orbitrap Fusion Lumos Tribri,Thermo Scientific Exploris以及氢气交换质谱仪配合机械臂为蛋白贡组学、代谢组学和蛋白测序提供了全面的分析手段，包括蛋白质和代谢物的分离、质谱分析、结构分析以及动态信息研究;

（3）生物药物表征平台

该平台配备了DSC-FTRR差示扫描量热仪与傅立叶变换拉曼光谱仪，氢气交换质谱仪配备机械臂，为生物药物表征提供了全面的分析手段，包括生物药物的分离、纯化、结构分析和动态信息研究:

（4）基于10x Genomics的单细胞分析平台

该平台能够完成基于10x Genomics单细胞分析平台的检测流程包括单细胞分选、cDNA合成、文库制备、文库质量检测、PCR扩增以及高通量测序;

（5）基于Fluidigm的单细胞质谱流式检测平台

采用基于Fluidigm Helios流式细胞仪(Mass Cytometry Systemfor Single Cell Analysis)用于单细胞质谱分析，该平台能够完成包括单细胞捕获、cDNA合成、实时定量PCR分析、目标区域扩增以及质谱流式细胞分析;

（6）基于高精度质谱的免疫多肽组学及免疫学检测平台

基于高精度质谱的免疫多肽组学及免疫学检测平台，能够完成包括多肽分离、纯化、合成、质谱分析、免疫学检测以及分子相互作用研究;

（7）生信云平台

基于生物信息分析方法的生信云平台，能够完成一整套的生物信息学解决方案，包括组学数据的质量分析、差异表达分析、差异表达物GO、KEGG、COG注释分析、聚类分析、相互作用网络等多层次网络和通路的分析。

 

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

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