Edman降解法测序反应条件

Edman降解（Edman degradation）法即在弱碱性条件下使蛋白质肽链N末端游离α残基与yìliúqíngsuānběnzhǐ（PITC）反应，然后用酸处理，从多肽链上仅使氨基末端残基以氨基酸的苯基乙内酰liúniào（PTH）衍生物的形态游离出来，然后测序并进行序列分析。

 

Edman降解法测序是通过一次次循环反应完成的，在每一轮的循环步骤中都包含偶联、裂解、转化以及氨基酸识别过程，其反应条件如下所示：

 

偶联条件：以气态形式输送12%三甲基胺水溶液（pH=8.0-9.0），输送含有yìliúqíngsuānběnzhǐ（PITC）的zhènggēngwán溶液并重复碱溶液的输送。45-48℃进行偶联化学反应，惰性气体干燥并使用zhènggēngwán和乙酸乙酯分析纯溶液洗涤。

 

裂解条件：输送几微升的无水三fúyǐsuān（TFA）并在45-48℃进行裂解，之后用惰性气流干燥除酸。输送丁基氯以溶解释放的苯胺唑啉酮(ATZ）氨基酸，ATZ氨基酸丁基氯混合溶液输送入转化器，并重复使用丁基氯溶剂抽提。

 

转化条件：输送25%-40%无水三fúyǐsuān（TFA）水浴液（转化介质R4）至转化器，45-50℃转化10-20分钟。苯异硫尿氨基酸（PTH氨基酸）溶解于一种合适的溶剂混合物，如20%yǐjīng水溶液含或不含乙酸钠添加剂以调节pH；这样可直接注入高效液相色谱（HPLC）系统的HPLC色谱柱上柱。

 

序列分析：运行空白循环，运行PTH-氨基酸并校准，将每个循环切割下来的氨基酸于PTH-氨基酸进行比较并与前后循环反应后的氨基酸进行对比，最终确定蛋白质肽链N-末端氨基酸序列。

 

百泰派克生物科技采用岛津公司Edman测序系统，为广大科研工作者和科研客户提供基于Edman降解的蛋白质N端测序服务。采用我们的测序系统，可以测定N端30个氨基酸的序列信息。采用特定的蛋白上样系统，可以测定N端的60-70个氨基酸。百泰派克生物科技也建立了以先进的LC-MS/MS技术进行N-端测序的平台，可以测出封闭和修饰的蛋白质末端，与基于Edman降解的蛋白质N端测序形成互补，保证N端测序服务的顺利进行。

 

其他服务项目

 

优质检测平台

（1）基于生物化学、分子生物学、色谱的检测分析平台

该平台配备了Agilent 2100 生物分析仪、ProteinSimple凝胶成像系统、高效液相色谱系统，为蛋白质组学、代谢组学分析保驾护航，包括样品制备、分离纯化分子量测量、杂质表征表达研究等:

（2）基于质谱技术的蛋白质组学分析平台、代谢组学分析平台、蛋白测序平台

该平台配备了超高效液相色谱质谱联用，Orbitrap Fusion Lumos Tribri,Thermo Scientific Exploris以及氢气交换质谱仪配合机械臂为蛋白贡组学、代谢组学和蛋白测序提供了全面的分析手段，包括蛋白质和代谢物的分离、质谱分析、结构分析以及动态信息研究;

（3）生物药物表征平台

该平台配备了DSC-FTRR差示扫描量热仪与傅立叶变换拉曼光谱仪，氢气交换质谱仪配备机械臂，为生物药物表征提供了全面的分析手段，包括生物药物的分离、纯化、结构分析和动态信息研究:

（4）基于10x Genomics的单细胞分析平台

该平台能够完成基于10x Genomics单细胞分析平台的检测流程包括单细胞分选、cDNA合成、文库制备、文库质量检测、PCR扩增以及高通量测序;

（5）基于Fluidigm的单细胞质谱流式检测平台

采用基于Fluidigm Helios流式细胞仪(Mass Cytometry Systemfor Single Cell Analysis)用于单细胞质谱分析，该平台能够完成包括单细胞捕获、cDNA合成、实时定量PCR分析、目标区域扩增以及质谱流式细胞分析;

（6）基于高精度质谱的免疫多肽组学及免疫学检测平台

基于高精度质谱的免疫多肽组学及免疫学检测平台，能够完成包括多肽分离、纯化、合成、质谱分析、免疫学检测以及分子相互作用研究;

（7）生信云平台

基于生物信息分析方法的生信云平台，能够完成一整套的生物信息学解决方案，包括组学数据的质量分析、差异表达分析、差异表达物GO、KEGG、COG注释分析、聚类分析、相互作用网络等多层次网络和通路的分析。

 

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司(Beiing Bio-Tech Pack Technology Company Ltd.简称BTP)从事以生物质谱为依托的生物药物表征，大分子物质(包括蛋白质、多肽、代谢物)质谱分析以及小分子物质检测服务。

公司采用IS09001质量控制体系，zhuānyè提供以质谱为基础的CRO检测分析服务;

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