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- 2025年07月16日
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康宁
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文献和实验Whole mount in situ hybridization with digoxygenin probes
of samples A. Embryos : Harvest eggs into a nested screen, rinse with dH2O + 0.02% Triton X-100. Dechorionate with 50% bleach (2') , rinse again. Transfer into a 15ml capped tube. B. Ovaries : Dissect ovaries in EBR. Transfer whole ovaries into a 15
mL冰醋酸调节PH值，然后继续用浓盐酸调节pH值至约5左右.最后定容至500mL。 1.4 Buffer QBT:(平衡用) 成分：750mL NaCl; 50mM MOPS.Ph7.0;15% 异丙醇，0.15% Triton X-100 配制：溶解43.83g NaCl, 10.46g MOPS到800 mL 双蒸水中，调节pH值至7.0，然后加入150mL 异丙醇和15Ml Triton X-100,加水定容至1L。 1.5 Buffer QC：（洗涤用） 成分：1.0 M
橱中放1hr。 2.准备电泳液：1×MOPS buffer（小号槽约配500ml，中号槽约配900ml） 3.制样：测好浓度后按以下体系加样 15 mg RNA + 灭菌的DEPC水 10 ml Sample buffer 8 ml loading buffer 2 ml EB (10mg/ml,专用于RNA) 0.03 ml 65℃水浴变性10 min，立即放冰上，直至点样 4.点样：点样要仔细，不要漏出，并记录点样顺序。 5.电泳：中号槽: 电压100V电泳
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