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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名:
BSA PLLA Particles
- 库存:
100
- 供应商:
百欧泰(biotyscience)
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文献和实验最近尝试使用CFSE检测人外周血CD4+T细胞体外扩增情况,操作流程如下:1、分离CD4+T:Ficoll分离人外周血PBMC,CD14磁珠(Miltenyi)阴选其中CD14-细胞,CD4磁珠(Miltenyi)阳选CD4+T细胞,流式检测CD4+T纯度>98%(两步法按照Miltenyi CD4磁珠protocol);2、CFSE标记:CFSE试剂购自Invitrogen(C34554)。标记步骤按照试剂protocol,即:定容至1x106个细胞/ml→直接向细胞悬液中加入5mM
,通过预染蛋白marker来确定电泳停止时间。 (4) 湿转法,转膜条件:300mA恒流;0.45um孔径PVDF膜,转膜时间1h。转膜完成后丽春红染色试剂对膜进行染色,观察转膜效果。 (5) 封闭:将膜完全浸没于5%BSA-TBST中,水平摇床孵育2h(RT)。 (6) 一抗孵育:5%BSA-TBST稀释一抗, 4℃水平摇床孵育过夜。 (7) 次日,洗膜:TBST洗3次,每次10min。 (8) 二抗孵育:5%BSA-TBST稀释二抗:山羊抗兔,山羊抗鼠IgG(H+L)HRP
PCR引物设计和优化(PCR PRIMER DESIGN AND REACTION OPTIMISATION)
, gelatin or BSA to 100ug/ml, and/or non-ionic detergents such as Tween-20 or Nonidet P-40 or Triton X-100 (0.05 - 0.10% v/v) (Innis and Gelfand, 1990)。 Modern formulations may differ considerably, however - they are also generally proprietary. PCR
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