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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
避光、密封;2-8℃
- 库存:
372
- 供应商:
成都瑞芬思德丹生物科技有限公司
- CAS号:
121747-89-5
- 规格:
5mg
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文献和实验(一)保存 当获得产生所需的单克隆 抗体的杂交瘤细胞 后,必须将一部分杂交瘤细胞 保存,否则在连续传代的过程中,可能产生突变或染色体的漂移以至丧失固有特性或丢失产生抗体的特性。另外在长期的培养过程中,难免不发生污染以至于毁灭。所以必须冷藏保存一部分。保存方法如下: 1.材料 (1) 细胞 :取对数生长期的细胞 。 (2) 10%二甲基亚砜保护液(二甲基亚砜能损坏滤器,而又被高压所破坏
min ,去上清。细胞沉淀用 10 %二甲基亚砜保护液制成悬液,使成 1.0 × 107 细胞/ ml 。 (3) 取样,台盼兰染色,计数活细胞,应在 95 %以上。 (4) 用注射器将细胞分装安瓶,每瓶 0.5ml ~ 1.0ml ,熔封安瓶。 (5) 放 4 ℃ 2h 。 (6) 放液氮罐气态部分( -70 ℃ ) 15h 。 (7) 转入液氮部分。
)。4.培养时间。200ul的培养液对于10的4~5次方的增殖期细胞来说,很难维持68h,如果营养不够的话,细胞会由增殖期渐渐趋向G0期而趋于静止,影响结果,我们是在48h换液的。5.MTT法只能测定细胞相对数和相对活力,不能测定细胞绝对数。做MTT时,尽量无菌操作,因为细菌也可以导致MTT比色OD值的升高。6.理论未必都是对的。要根据自己的实际情况调整。7.实验时应设置调零孔,对照孔,加药孔。调零孔加培养基、MTT、二甲基亚砜。对照孔和加药孔都要加细胞、培养液、MTT、二甲基亚砜,不同的是对照孔加溶解
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