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- BB-410332
- 上海
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 供应商：
贝博
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
50T
样品染色：
1、 离心收集悬浮细胞。离心机300-500g力，2-8°C，离心时间5分钟，弃培养基。
2、 用冷PBS洗涤细胞两次。（300g-400g，2-8°C，离心时间5分钟收集细胞）。
3、 用100 μl 1X Annexin V结合液悬浮细胞，浓度大约为1-5 X 106 cells/ml。
4、 在细胞悬浮液中加入5 μl Annexin V-APC染色液，轻轻混匀后于2-8°C避光条件下孵育5-10分钟。
5、 加入5-10 μl Nuclear Green 染色液后轻轻混匀于2-8°C避光条件下孵育1-3分钟。
6、 加入400 μl PBS或1X Annexin V结合液，轻轻混匀。
7、 立即用流式细胞仪检测。
流式细胞仪分析：
经处理过的细胞此时可以在流式细胞仪上分析。
按照常规的流式凋亡检测的操作即可。
Annexin V-APC的荧光最大激发波长652 m，最大发射波长670 m；Nuclear Green 荧光最大激发波长502 m，最大发射波长在526 m。
上机检测前，须用待测细胞制备质控样本来设定流式细胞仪的荧光补偿和设置十字门的范围：
（I） 未转染GFP等标记的细胞
① 空白管：阴性对照组细胞，没有染色的细胞。不加Annexin V/APC，Nuclear Green 。用于调节电压。
② 单染管：有明显凋亡的细胞，只加Annexin V/APC染色。用于调节补偿。
③ 单染管：有明显凋亡的细胞，只加Nuclear Green 染色。用于调节补偿
④ 检测管：待测的处理细胞，加Annexin V/APC，Nuclear Green 。用空白管和单阳管调节好电压补偿后，获得所需要的流式数据。
（II） 转染GFP细胞
① 未转染空白管：未转染细胞，阴性对照组细胞，没有染色的细胞。不加Annexin V/APC，Nuclear Green 。用于调节电压。
② 转染GFP空白管：转染GFP的对照组细胞，没有染色的细胞。不加Annexin V/APC，Nuclear Green 。用于调补偿
③ 未转染单染管：未转染且有明显凋亡的细胞，只加Annexin V/APC染色。用于调节补偿。
④ 未转染单染管：未转染且有明显凋亡的细胞，只加Nuclear Green 染色。用于调节补偿
⑤ 检测管：待测的处理细胞，加Annexin V/APC，Nuclear Green 。用空白管和单阳管调节好电压补偿后，获得所需要的流式数据。
【注】：
具体流式设置按常规方法即可。
请参照流式细胞仪说明书或咨询所使用的仪器的技术支持。
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文献和实验实验过程中Annexin V染不上色或阳性率偏低。可能的原因如下：
1. 用于检测的流式细胞仪/显微镜设置不当。调整使用正确的仪器设置。
2. 确定实验中的诱导剂是否能产生凋亡。可通过设定确切凋亡诱导效果的阳性药物对照来排除这一情况。
3. 细胞未启动凋亡。重新确定诱导后凋亡启动的时间点（时程实验）。
4. 细胞数量偏少。增加细胞数量。
5. 贴壁细胞消化不当。Annexin V 跟PS 的结合需要Ca2+离子，结合液中含有Ca2+，EDTA 的消化会影响染色，建议使用无EDTA 的胰酶，或者消化后用PBS洗涤干净。
实验过程中阳性率偏高。可能的原因如下：
1. 用于检测的流式细胞仪/显微镜设置不当。调整使用正确的仪器设置。
2. 细胞本身活力太差。实验中发现未经诱导凋亡的对照细胞经染色后AnnexinV+/PI+双阳性的细胞比例过高，造成这种结果的原因可能是细胞本身活力太差。建议用台盼蓝染色计算细胞的活力，台盼蓝拒染的细胞应大于95%。若活力偏低低，建议重新复苏细胞，通常刚复苏的细胞至少要传代3 次以后才能进行实验。
1.Hongjuan Li, et al.
Nucleus-targeted nano delivery system eradicates cancer stem cells by combined thermotherapy and hypoxia-activated chemotherapy
Biomaterials 2019 （IF=10.317）
2.Wei Bing, et al.
Programmed Bacteria Death Induced by Carbon Dots with Different Surface Charge
Small 2016 （IF=11.459）
3.Linchong Sun, et al.
cMyc-mediated activation of serine biosynthesis pathway is critical for cancer progression under nutrient deprivation conditions
Cell Research 2015 （IF=20.507） 4.Kerong Deng, et al.
Enhanced Antitumor Efficacy by 808 nm Laser-Induced Synergistic Photothermal and Photodynamic Therapy Based on a Indocyanine-Green-Attached W18O49 Nanostructure
Advanced Functional Materials 2015 （IF=16.836）
5.Wenqiao Zang, et al.
miR-663 attenuates tumor growth and invasiveness by targeting eEF1A2 in pancreatic cancer
Molecular Cancer 2015 （IF=15.302）
Annexin V是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸PS有高度亲和力，可通过细胞外侧暴露的PS与凋亡早期细胞胞膜结合，将Annexin V标记上荧光染料利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡。 由于凋亡晚期或坏死细胞膜完整性丧失，细胞核染色液可进入细胞内染色细胞核，搭配Annexin V使用可将处于不同凋亡时期的细胞区分开。 A．悬浮细胞： 按照实验方案进行凋亡诱导，300 g离心5 min，弃上清，收集细胞，用PBS洗涤细胞一次，轻轻重悬浮细胞并计数。 取1~5 ×
Q：Annexin V 凋亡检测试剂盒的原理是什么？ A：Annexin V 是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸 PS 有高度亲和力，可通过细胞外侧暴露的 PS 与凋亡早期细胞胞膜结合，将 Annexin V 标记荧光染料如 FITC 利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡。 碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)或 7-AAD 可与双链 DNA 特异性结合，并产生强烈的荧光，正常情况下无法透过细胞膜。由于凋亡晚期或坏死细胞膜丧失完整性，核染料 PI 或 7-AAD
示例： Jurkat细胞用1μM喜树碱(Camptothecin) (左)或未加药 (右)处理4h，FITC-Annexin V/PI荧光双染细胞凋亡检测试剂盒染色后，流式细胞仪荧光检测。 Annexin V-FITC单阳性细胞为早期凋亡细胞，Annexin V-FITC和PI染色双阳性的细胞为坏死细胞或者晚期凋亡。PI单染色阳性位裸核细胞。 实测数据可能会因细胞类型、细胞凋亡情况，检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。 流式检测细胞凋亡的数据分析方法： 1） 选中所有颗粒，将FSC
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