人视网膜色素上皮细胞 原代细胞 (带荧光鉴定)

人视网膜色素上皮细胞 原代细胞 (带荧光鉴定)

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  • 华尔纳生物
  • N-77249
  • 武汉
  • 2025年07月15日
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    • 英文名

      人视网膜色素上皮细胞

    人视网膜色素上皮细胞/人视网膜色素上皮细胞/人视网膜色素上皮细胞
    细胞代次低,活性高,品质保证,提供全程7*24小时专业技术指导售后服务   (养不活无理由全额退款)

    细胞蓝色图

    • 产品名称:

      人视网膜色素上皮细胞

    • 组织来源:

      眼组织

    • 细胞形态:

      上皮样,不规则细胞

    • 种属来源:

    • 规格:

      5×10⁵Cells/T25培养瓶

    • 传代特性:

      细胞特性确定传代


    人视网膜色素上皮细胞
    一、细胞基本属性
    细胞名称 人视网膜色素上皮细胞
    组织来源 眼组织
    商品货号 ORCH412
    种属来源
    产品规格 5×105cells/T25细胞培养瓶
     
     
    细胞简介
    视网膜色素上皮位于脉络膜和光感受器细胞外节之间,是视网膜下腔和脉络膜血 管之间的离子、水、营养物质和代谢终产物转运通道。视网膜色素上皮参与视黄 醇循环,吞噬脱落的光感受器细胞外节以维持光感受器细胞兴奋性,并分泌多种 生长因子,  帮助维持脉络膜血管内皮细胞和光感受器细胞的结构完整性。
    培养基 原代上皮细胞培养体系
    换液频率 每2-3天换液一次
    生长特性 贴壁培养
    细胞形态 上皮样,不规则细胞
    传代特性 细胞特性确定传代
    消化液 0.25%胰蛋白酶
    培养条件 气相:  空气,95%;CO2 ,5%
    质量检测: 实验室分离的人视网膜色素上皮细胞经细胞角蛋白-8(CK-8)免疫荧光染色为阳性,纯 度可达90%以上,且不含有HIV-1、  HBV、  HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
    人视网膜色素上皮细胞体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。     
    二、细胞培养状态 
    发货时发送细胞电子版照片  
    三、使用方法   
    在技术部标准操作流程下,建议您收到细胞后尽快进行相关实验。  
    客户收到细胞后,请按照以下方法进行操作。  
    1. 取出T25细胞培养瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h,以稳定细胞状态。  
    2. 贴壁细胞消化 
    1)吸出T25细胞培养瓶中的培养基,用PBS清洗细胞一次;  
    2)添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培养瓶中,轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃温浴1-3min;倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后,再加入5ml完全培养基终止消化;  
    3)用吸管轻轻吹打混匀,按传代比例接种T25培养瓶传代,然后补充新鲜的完全培养基至5mL,置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养;  
    4)待细胞完全贴壁后,培养观察;之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。  
    3. 悬浮细胞处理 
    1)收集T25细胞培养瓶中的培养基至50ml离心管中,用PBS清洗细胞培养瓶1-2次,收集清洗液;  
    2)1200-1500rpm离心3min,弃上清,收集细胞沉淀;
    3)加入5ml新鲜完全培养基,用吸管轻轻吹打混匀、分散细胞;将分散好的细胞调整合适密度接种至培养器皿中,置于37°C、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养;
    4)若遇到悬浮细胞团块较大,无法机械吹散时,向步骤2)中细胞沉淀添加0.25%胰蛋白酶消化液2mL至离心管中,用吸-管轻轻吹打混匀,37°C温浴2-3min,消化结束后,加入胰酶抑制剂(或血清)终止消化,用吸管轻轻吹打,分散细胞;1200rpm离心5min,弃上清,收集细胞沉淀;
    5)加入5ml新鲜完全培养基,用吸管轻轻吹打混匀;按传代比例进行接种传代,然后补充新鲜的完全培养基至5mL,置于37°C、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养;
    6)待细胞状态稳定后,培养观察;之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。     
    4. 细胞收货脱落 
    1)收集所有细胞悬液,1000rpm,离心5min,保留沉淀;  
    2)添加0.25%胰蛋白酶消化液0.5mL至离心管中,重悬沉淀,放置于37℃消化3min(或4℃冰箱静置5-7min);消化完向离心管内加入5ml完全培养基终止消化;  
    3)经1000rpm,离心5min,丢弃上清,用5ml完全培养基(补加1%FBS,促进贴壁)重悬沉淀,接种于新的培养瓶内;  
    4)待细胞完全贴壁后,培养观察;之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基(37℃预热)。  
    5. 细胞实验 
    因原代细胞贴壁特殊性,贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿(如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等)时,需要对实验器皿进行包被,以增强细胞贴壁性,避免细胞因没贴好影响实验;包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚赖氨酸PLL(0.1mg/ml),明胶(0.1%),依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。         
    四、注意事项 
    1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。  
    2. 在细胞培养过程中,请注意保持无菌操作。  
    3. 传代培养过程中,胰酶消化时间不宜过长,否则会影响细胞贴壁及其生长状态。  
    4. 建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和技术部沟通;由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,详尽告知细胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。   
    5. 该细胞只可用于科研。   
    1)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核    
    2)本产品未通过用于活体诊断的审核   
    备注:由于实验所用试剂、操作环境及操作手法的不同,以上方法仅供各实验室参考
     

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