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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
33
- 英文名:
LB Broth
- 供应商:
上海联祖
- 规格:
250g
英文名称:LB Broth
产品规格:250g
发货周期:1~3天
产品价格:询价
| 货号 | 规格 | 发货期 | 用途 |
| LZ-PYJ5310 | 250g | 1~3天 | 仅供科研实验 |
级别:BR
成分(g/L)
胰蛋白胨:10.0
酵母浸粉:5.0
氯化钠:10.0
PH:6.8~7.2
用法:取本品25克,溶解于1000mL蒸馏水中,加热煮沸直至全部溶解,121℃高压灭菌15分钟备用
标准:BD
性状(以下信息仅供参考):干燥粉末。易吸湿。
用途:本品仅供科研,不得用于其它用途。(以下用途仅供参考)用于分子生物学实验中大肠杆菌的保存和培养
保存:RT
培养基的计数方法:
一、稀释涂布平板法(亦称活菌计数法)是一种常用的微生物计数方法,其原理是当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数,可以推测出样品中大约含有多少活菌。这种方法操作简便,适用于菌体大小和质量都相近的类群,如细菌、酵母菌等的计数。计算公式为每克样品中的菌株数=C/V*M,其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数,V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL),M代表稀释倍数。
二、显微镜直接计数法利用特定细菌计数板或血细胞计数板,在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量。这种方法不能区分死菌与活菌,但可以估算出1mL培养中液中细胞个数,计算公式为1mL 培养中液中细胞个数=小方格中细胞平均数×400 ×104×稀释倍数(个/mL)。显微镜直接计数法的缺点是不能区分死菌与活菌,因此计数到的细胞数包括了死亡的细胞数。
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培养基操作步骤:
一、用法:称取本品33.0g,加热溶解于1000ml蒸馏水中,分装三角瓶,121℃高压灭菌15分钟,备用。
二、配料:首先,根据培养基的配方,准确称量各种成分,包括粉状和非粉状的成分,如肉膏等,放入烧杯中。
三、溶化:向烧杯中加入适量的水,然后搅拌以溶解各成分。对于含有琼脂的培养基,应注意防止外溢,并在溶化过程中保持搅拌。
四、矫正pH:在培养基溶解均匀并冷却至室温后,使用pH试纸测量pH值,然后根据需要加入酸或碱来调整至合适的pH值。
五、澄清过滤:使用滤纸或多层纱布对培养基进行过滤,以去除杂质。
六、分装:将制备好的培养基分装入试管内或三角瓶内,确保管(瓶)口塞上棉塞,以防止外界微生物污染。
七、灭菌:对分装好的培养基进行灭菌处理,通常是通过高压灭菌来确保无菌环境。
八、检定:灭菌后的培养基可以进行质量检定,以确保其符合使用要求。
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文献和实验感受态细胞的制备: 1, 把DH5菌种分别接种在含氨卞的LB平板和不含氨卞的LB平板上,培养16-18小时。结果在不含氨卞的LB平板上DH5菌长出单个菌落,而在含氨卞的LB平板上无可见菌落生成,证明DH5菌未被杂菌污染; 2, 挑取单个菌落接种于2ml不含氨卞的LB肉汤,37度,150rpm,,振荡培养过夜; 3, 取上述0.2ml菌液接种于30ml不含氨卞的LB肉汤,37度,150rpm,,振荡培养3小时,使其OD600=0.4; 4, 将上述培养物转入40ml离心管,冰浴10
沉淀加入750μl预冷的(4℃)75mmol/L CaCL2 溶液,轻轻吹打菌悬液,放冰浴30min。 5.4℃3000rpm/min,离心5min,弃上清。 6.菌体沉淀加入200微升预冷的75mmol/LCaCL2溶液,冰浴4min以上。4℃保存备用。 (二)质粒转化 【材料】 1.pBR322 质粒DNA, 2.感受态菌75mmol CaCl2 3.LB肉汤培养基,无药LB琼脂平板,氨苄青霉素琼脂平板(50ug/ml) 4.
6) 菌体沉淀加入200微升预冷的75mmol/LCaCl2 溶液,冰浴4min以上。4℃保存备用。 2. 质粒转化 1) 取2个洁净,灭菌的EP管,加入各成分。 2) 上述2个试管充分混均匀后,置冰浴30min。 3) 42℃2min或37℃5min,立即置冰浴2min。 4) 加入1ml LB肉汤培养基,37℃静止培养1h。 3. 转化子筛选 1) 取实验组培养菌液涂布在氨苄青霉素琼脂平板(50ug/ml
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