Epithelial-Mesenchymal Transit

Western实验常用于定量或定性确定组织或细胞中蛋白质的表达情况。Epithelial-Mesenchymal Transition (EMT) Antibody Sampler Kit产品应用Western blot实验步骤(仅供参考)：
准备工作：

    样本制备：
        提取蛋白质样本，可以是细胞总蛋白提取物或组织样本的裂解提取物。
        根据需要，可以用蛋白质酶抑制剂和磷酸酶抑制剂等添加到裂解液中，以保持蛋白质的完整性。

    蛋白质定量：
        使用BCA法、Bradford法或其他蛋白质定量方法测量提取的蛋白质浓度。

    SDS-PAGE凝胶制备：
        根据所研究蛋白质的大小和数量，选择合适浓度和厚度的SDS-PAGE凝胶。
        制备上胶缓冲液和下胶缓冲液。

    电泳：
        将样品加入到凝胶孔中，进行蛋白质电泳分离。
        使用恒定电流或恒定电压条件进行电泳，直到蛋白质样品进入分离凝胶。

转移：

    半干法转移：
        将分离的蛋白质从凝胶转移到膜上（如PVDF或NC膜）。
        准备转移缓冲液和转移装置（如Semi-Dry Transfer系统）。
        转移条件通常为约1小时至2小时。

免疫检测：

    封闭：
        使用牛血清白蛋白（BSA）、非脂奶粉或其它的蛋白质作为阻断剂，封闭膜上非特异性结合位点。

    一抗孵育：
        加入稀释后的第一抗体（primary antibody），使其与膜上的目标蛋白结合。
        孵育时间和温度根据抗体厂家推荐，通常为1小时至过夜。

    洗涤：
        用TBST或PBS等缓冲液洗膜，去除未结合的第一抗体。

    二抗孵育：
        加入与第一抗体宿主种类不同的酶标记的二抗（secondary antibody），使其与第一抗体结合。
        二抗通常是抗兔、抗鼠、抗人等。
        孵育时间和温度根据二抗厂家推荐，通常为1小时。

    洗涤：
        用TBST或PBS等缓冲液洗膜，去除未结合的二抗。

    显色：
        使用化学发光或染色剂（如TMB、DAB、ECL等）检测酶标记的二抗与膜结合的目标蛋白质。

    成像和分析：
        使用Western blot成像系统（如化学发光成像系统）获取蛋白条带的图像。
        使用分析软件测量和分析蛋白条带的强度和大小。

注意事项：

    每一步的条件和实验设定应根据具体的蛋白质和抗体特性进行优化。
    保持实验环境清洁，避免污染和交叉污染。
    记录详细的实验步骤和条件，以便复现和比较不同批次实验结果。

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