T7 RNA Polymerase，EnzymoPure™,

T7RNA聚合酶是一种来源于T7噬菌体的一种依赖于DNA的RNA聚合酶，具有高度特异性的5'→3'端的RNA聚合酶活性。T7RNA聚合酶对T7启动子具有较高的特异性，能够以T7启动子下游序列为模板合成大量的RNA。
产品组分
T7 RNA Polymerase (50U/μL)
10×HH T7 Buffer

使用说明
体系配制（50μl）

10×HH T7 Buffer: 400 mM Tris-HCl (25℃，pH 8.20), 60 mM MgCl2, 100mM DTT, 20mM spermidine.
按以上顺序添加反应组分*10xHH T7 Buffer 只适用于 2mM 终浓度的NTPS 投料量，如需7.5mM-10mM 投料量，请选用高产试剂盒系列产品。
反应时间：37℃℃孵育2 h。
反应终止：加入2 μL 0.2 M EDTA (pH = 8.0@ 25°℃)或者 75°℃ 加热 10 min。
DNA 模板去除：可用 DNasel(2 U) 37°C处理 15 min。
质量控制
1) 核酸内切酶残留检测：50μL反应体系中加入50U本酶和1μgλDNA在37°C下反应16小时，琼脂糖凝胶电泳DNA谱带不发生变化。
2) 核酸外切酶残留检测：50μL反应体系中加入50U本酶和1μgλ-HindIIIdigestDNA在37°C下孵育16小时，琼脂糖凝胶电泳DNA谱带不发生变化。
3) 核酸切口酶残留检测：50μL反应体系中加入50U本酶和1μgpBR322DNA在37°C下孵育16小时，琼脂糖凝胶电泳DNA谱带不发生变化。
4) RNase残留检测：50μL反应体系中加入50U本酶和1.6μgMS2RNA在37°C下孵育16小时，琼脂糖凝胶电泳RNA谱带不发生变化。
5) 热失活：75°C，10min

注意事项
1、转录反应配制应在无 RNase 污染的环境中完成，操作过程建议佩戴手套。使用无核酸酶的水、吸头和反应管进行体系配制。
2、可以通过提高 NTP 浓度(每个浓度可达 10mM)，提高 RNA产量，同时需要适当增加Mg”浓度。
3、反应体系需要在室温下配制，避免在4℃时 DNA 与 10xHH T7 Buffer 发生反应产生沉淀。
4、模板 DNA 线性化不完全，可能降低转录产物产量和长度。
5、反应体系体积可根据实际需求按比例进行放大或缩小。
6、反应产物若出现下降，可向反应体系加入20 mM 新鲜 DTT。
7、转录片段≤500bp，建议延长转录时间为4-8 h.
8、10xHH T7 Buffer 冻存后容易产生沉淀在使用前请确认是否完全溶解，如果有沉淀产生，可于 37 ℃充分加热后摇晃复溶
9、10xHH T7 Buffer 只适用于 2mM 终浓度的 NTPS投料量，如器7.5mM-10mM 投料量，请选用高产试剂盒系列产品。