- ￥514.80 - 920.40
- 西格
- XG-P3156
- 国产
- 2025年07月14日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
46
- 保质期：
12 个月
- 供应商：
上海西格
- 保存条件：
2-8°C
- 规格：
250U 5u/ul/500U 5u/ul
| 规格： | 250U 5u/ul | 产品价格： | ￥514.8 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 500U 5u/ul | 产品价格： | ￥920.4 |
| 货号 | 产品名称 | 规格 |
| XG-P3156 | 热启动DNA聚合酶 | 250U 5u/ul |
| XG-P3156 | 热启动DNA聚合酶 | 500U 5u/ul |
1、变性温度和时间：
热启动DNA聚合酶保证模板DNA解链完全是保证整个PCR扩增成功的关键。加热90~95°C, 30~60s，再复杂的DNA 分子也可变性为单链。温度过高或高温持续时间过长，可对Taq酶活性和dNTP分子造成损害。
2、复性温度和时间:
PCR扩增特异性取决于复性过程中引物与模板的结合。复性温度越高，产物特异性越高。复性温度越低，产物特异性越低。需根据引物的Tm值具体设定。
3、延伸温度和时间:
一般位于Taq酶最适作用温度70~75°C之间。引物小于16个核苷酸时，过高的延伸温度不利于引物与模板的结合，可以缓慢升温到70~75°C。延伸反应时间，可根据待扩增片段的长度而定，小于1kb, 1min足够；大于1kb需加长延伸时间。Taq酶可根据1kb/min增加时间。这里需要注意，延伸时间过长可能出现非特异扩增。因此需要设置恰到好处的延伸时间。
4、循环数:
其他参数选定后，PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。理论上说20〜25次循环后，PCR产物的积累即可达到最大值，实际操作中由于每步反应的产率不可能达到100%，因此不管模板浓度是多少，20~30次是比较合理的循环次数。循环次数越多，非特异扩增增加。
PCR的特点：
特异性强：使用两对引物进行扩增提高了特异性，第一轮PCR中由外引物错配产生非特异性产物，同时在第二轮PCR中内引物与错误片段配对扩增的概率极低，降低了扩增多个靶位点的可能性。
灵敏度高：进行两轮PCR扩增，可以执行更多的循环，从低拷贝样本中扩增得到足量的产物，克服了单次扩增平台期限制，提高PCR的灵敏度。
降落PCR与温度梯度PCR的区别：
降落PCR与温度梯度PCR都是对反应体系中的退火温度进行优化，但两者在原理上有所不同。
温度梯度PCR是为了找到最适的退火温度，设置不同的退火温度进行多管PCR，将其分别放置在PCR仪中的不同温度模块进行反应，最终找到最适的退火温度，并进一步以此退火温度进行普通PCR扩增。
降落PCR是为了提高反应的特异性，通过设计一系列不断降低的退火温度，在同一PCR管内进行PCR扩增，最终获得大量的特异性扩增产物。
与温度梯度PCR相比，降落PCR更有优势。温度梯度PCR需要多次反应或多管反应找到最适的退火温度，之后还需以找到的最适退火温度再次进行PCR，才能得到较好的扩增效果，操作比较繁琐。降落PCR只需一次反应就可以获得很好的扩增效果，避免了对每对引物进行最适退火温度的优化和测定工作。
降落PCR适用于不确定引物的最适Tm值，或引物扩增效果不佳时，不了解目的模板同源性程度，使用降落PCR可以快速、特异的得到目的扩增片段。根据不同实验的需要，降落PCR还可与其它PCR方法同时使用，如实时定量降落PCR、竞争降落PCR等。
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文献和实验对于 Taq 酶扩增性能更强。 1. 选择热启动酶降低非特异性扩增 在使用 Taq 酶进行扩增时，有时会出现非特异性扩增，可能的原因可以从模板、引物、体系、程序中一一排查。如模板是否被污染，引物特异性如何，Mg2+浓度偏高等等，其中一个不可忽视的原因是 DNA 聚合酶的种类是否合适。如果排查了其它原因仍旧有非特异性产物，可以选择热启动酶重新实验，即可有效减少或消除体系中其它产物的积累。常用的热启动酶分为两类：一类是化学法修饰的热启动酶，如 Ace Taq ，预变性 95℃5 - 10 min 即可
Polymerase Chain Reaction--热启动PCR
This procedure is a "hot start" PCR cycle for use with large primers. PCR mass-produces DNA contained in the source plasmid between the two primer-binding sequences, eventually producing linear DNA starting with Primer 1, continuing
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