4,4'-二氨基二苯砜，80-08-0，Moligand™,

RNAi技术专题之：体外转录合成双链RNA

突变和化学修饰的耐受性，认为siRNA的5’端相对于3’端具有对突变的较高耐受性。有学者认为正义链3’突出端的任何碱基修饰对siRNA作用效果均无明显影响。还有学者认为与反义链互补的正义链3’端发生1—4个碱基的错配反而有助于增强RNAI的活性。二、siRNA制备方法目前为止较为常用的5种制备siRNAs的方法包括化学合成体外转录长片断dsRNAs经RNase III 类降解 (e.g. Dicer, E. coli, RNase III)siRNA表达载体或者病毒载体在细胞中表达siRNAsPCR制备

RT-PCR 引物的选择

随机引物 适用于长的或具有发卡结构的 RNA。适用于 rRNA、mRNA、tRNA 等所有 RNA 的反转录反应。主要用于单一模板的 RT-PCR 反应。 Oligo dT 适用于具有 PolyA 尾巴的 RNA。（原核生物的 RNA、真核生物的 Oligo dT rRNA 和 tRNA 不具PolyA 尾 巴。）由于 Oligo dT 要结合到 PolyA 尾巴上，所以对 RNA 样品的质量要求较高，即使有少量降解也 会使全长 cDNA 合成量大大减少。 基因特异性引物 与模板序列互补

Raf 蛋白 Ras 结合结构域的简并进化库合成以及利用片段互补法快速筛选二氢叶酸还原酶的快速折叠且稳定的克隆

筛选表达正确折叠的、稳定的和可以与其他分子（蛋白质、核酸、有机底物、过渡态类似物等）结合的多肽。目前建立的最完善的方法是噬菌体展示 [4，5，27]；综述 [ 28 〜30 ]，该方法将文库的扩增和筛选分开，分别在体内和体外进行，适用于与可以容易地固定在固体介质上的小分子或小肽结合的蛋白质，但不太适用于蛋白质与蛋白质相互作用研究或文库间筛选。近来，蛋白质片段互补检测（PCA) 成为一个替代选择 [ 31〜34 ] 。PCA 的策略是，将两个蛋白质分别与报告蛋白或酶的两个片段融合表达，两个目的