- ￥2269.90
- 阿拉丁
- 上海
- A598200
- 2025年07月14日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
避光;-20°C储存
- 英文名：
Aladdin ® 640SE (Aladdin ® 640 succinimidyl ester)
- 库存：
现货
- 供应商：
上海阿拉丁生化科技股份有限公司
- 规格：
A598200-1mg
aladdin® SE 是具有氨基反应活性的一类荧光染料。该类染料的SE基团可以与氨基基团反应生产稳定的酰胺键。相比于市面上其他同类染料，aladdin®是稳定性更强、水溶性更好、荧光强度更优的新一代荧光染料。
产品参数：
Absmax/Em(nm)：641/658；Absmax/Em(nm)：0.37；Extinction coefficient(ε)：105000；Optimal DOL(IgG)：4-7；
使用方法：
1. 实验材料
（1）IgG：IgG 不可含有能与染料反应的胺类化学物质， 如 氨基酸、 Tris 、BSA、明胶等。如果 IgG 中含有此类化学物 质，应用 pH~7.4 的 PBS 缓冲液预先透析处理。叠氮类化
合物的存在不会影响标记反应。
（2）无水 DMSO
（3）NaHCO3
（4）葡聚糖凝胶 G-25 透析柱
（5）PBS 缓冲液（pH~7.4）
（6）NaN3
（7）BSA
2. 标记方法和步骤
（1）准备标记抗体
用 0.1 M 的 NaHCO3 溶液（pH~8.3）稀释抗体， 使抗体 终浓度为 2.5 mg/mL。如果产品预先用磷酸盐缓冲液稀释， 如 PBS 缓冲液（不含胺基类化合物），那么可以直接在该缓冲液中加入约 1/10 体积 1M 的 NaHCO3 母液，使 NaHCO3终浓度为 0.1 M。
注： 蛋白浓度为 2.5 mg/mL 时，标记效率大概为 35%，蛋白 浓度低于 2.5 mg/mL 也可用于标记， 但标记效率会降低。当 蛋白浓度高于 5 mg/mL 时，标记效率可能更高。由于缓冲液和蛋白纯度存在差异性， 因而更精确的标记效率由实操条件决定。如果蛋白浓度过低，可以通过超滤法进行浓缩。
（2）准备染料储存液
室温预热一管 1 μmole 的 YF® SE，在管中加入 0.1 mL 的无水 DMSO，充分涡旋溶解染料，配制浓度为 10 mM 的 染料储存液。如果使用更微量的蛋白进行标记反应， 那么染料需要稀释至更低浓度。
注： a. 剩余的染料储存液应于-20℃低温存放，以备后续使 用。如果使用无水 DMSO 配制染料储存液，那么染料至少可以保存一个月。
b. 染料也可以用去离子水配制，但是由于染料在水中会缓慢水解，所以水配制的储液最好现配现用。
（3）标记反应步骤
a. 搅拌或涡旋混匀蛋白溶液，逐步滴加 15-25 μL 的染料储 存液（10 mM），使染料/蛋白的摩尔比在 9: 1 至 15: 1 的范 围内。YF® SE 标记 IgG 抗体的 DOL（结合于每个蛋白分子
上的染料数量） 范围请参考上表。
b. 在室温下搅拌反应 1 h，微量标记时也可在摇床上振荡孵育 1 h。
注： 在进行结合反应的同时， 进行步骤 2(4)，平衡葡聚糖凝胶 G-25 透析柱。
（4）从反应液中分离标记蛋白
a. 用 PBS 缓冲液（pH~7.4）平衡葡聚糖凝胶 G-25 透析柱（10 mm×300 mm）。
b. 将步骤 3(b)反应溶液加入柱子， 并用 1×PBS 缓冲液洗脱。首先洗脱出来的着色带是染料-蛋白结合物。
注：a. 对于小规模的标记反应， 为了避免过度稀释产物， 可以使用超滤装置去除结合物中的自由染料。
b. 当结合反应完成后，如不及时分离染料-蛋白结合物， 可以加入 50 μL 1M 赖氨酸终止反应。多数情况下，不需要 此操作， 因为剩余的未反应的染料在反应最后已经被充分水解。
3. 确定 DOL
（1）蛋白浓度的确定抗体浓度可通过以下公式计算：
C(mg/mL)={[A280 -(Amax × Cf)]/1.4} × 稀释因子；
a. C 是指实验收集的抗体浓度；
b. 稀释因子是指在光度测量时的稀释倍数；
c. A280 和 Amax 分别是指在 280 nm处的吸光度以及在吸收波长处的吸光度；
d. Cf 是校正因子， YF® SE 染料的 Cf 值请参考上面表格；
注：过柱洗脱的蛋白溶液直接用于吸光度检测可能浓度过大， 因此需要稀释到大约 0.1 mg/mL。稀释倍数（即稀释因子） 需要从起初抗体数量（比如 5 mg）以及蛋白液洗脱的总体
积来进行预估。
（2）DOL 的估算
DOL 通过下式计算：
DOL = (Amax × Mwt × 稀释因子)/(ε × C)
a. Amax ，稀释因子， C 值在 3(1)中已经明确；
b. Mwt 是指 IgG 的分子量(150,000)；
c. ε 是 YF® SE 的摩尔吸光系数，参考第一页表格；
d. 标记 YF® SE 的 IgG 抗体最适 DOL 值，请参考第一页表格， DOL 值会波动，但也能得到很好的实验效果。
注意事项：
1. 标记的蛋白如需长期储存，推荐加入5-10 mg/mL BSA和0.01-0.03% NaN3，以防止蛋白变性和微生物滋生。放置于4℃避光保存。若加入了终浓度为50%的甘油，可放-20℃保存。可稳定保存一年以上。
2. 操作过程注意避光，搅拌速度应适当以避免产生气泡。
3. 层析柱装柱时，尽量使柱体均匀，柱面平整，无气泡、裂隙。
4. 上样时注意，当柱顶缓冲液与凝胶平面相切时再加样品，洗脱时，当样品走至与凝胶平面相切时再加洗脱液。
5. 影响标记效率的其他因素还包括：温度、反应时间、pH、荧光染料与蛋白的量等，需注意控制。
6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套。
应用范围：
蛋白核酸标记染料
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文献和实验偶联物，最大限度的提高了信噪比。图2. CF染料的超强特异性；由于AF染料制备过程中含有大量带负电的磺化基团，容易非特异性结合正电基团，请看AF790 Dye与CF790的条带特异性对比。3. 优异的标记效率生物偶联后的活性染料一般很容易水解，会在运输，操作及储存中带来诸多不便，最终致染料结合效率低下。像Alexa Fluor® dyes,DyLight? dyes and IRDyes®等严重的磺化作用有较强的吸湿性，恶化水解作用等问题。例如： AlexaFluor® 488 在应用时琥珀酰亚胺脂酯
and IRDyes®等严重的磺化作用有较强的吸湿性，恶化水解作用等问题。所有Biotium的CF染料具有相对稳定的胺活性的SE基团型，这比大部分AlexaFluor 染料的SE更耐水解。总体来说，CF染料SE产品一贯的给出更高的标记效率，提供给用户更好的使用价值。 二、选择方案： 1、蓝色（350-450nm处激发） CF 350、Alexa Fluor 350、AMCA等----亮蓝和紫外光激发。 CF350是类似于Alexa Fluor 350和传统荧光染料AMCA的蓝色荧光染料，CF350
中观察到了问题，我们将乐于免费为客户提供解决问题的一系列方案。 10、可以举行双色分析吗？ 是的。CTL 通过ImmunoSpot®双色分析软件，可以对双色孔进行分析，包括那些双反色斑点的情况。11、可以使用普通邮寄方式发送板吗？ 只有彻底坏了的板或者干燥过的板才真正适合普通邮寄方式。 12、谁来进行扫描和分析？ CTL 中经过训练的科学家将为您提供扫描和分析服务。 13、扫描和分析的结果最终将以什么样的方式提供？ 你将收到每个孔的原始数据的扫描图像（（JPEG
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