N-甲酰基甘氨酸乙酯，3154-51-6，≥98%(GC)，

师弟问了我 25 个引物相关的问题

寡核苷酸的纯化。利用反向树脂和5’－ DMT 寡核苷酸存在强亲和力，但是提前终止的寡核苷酸不包含 DMT 基团，所以，我们能够成功的把想要的 N- 甲基寡核苷酸从提前终止的寡核苷酸杂质中分离出来。◆　 HPLC如果合成的寡核苷酸应用于克隆，定向诱变或定量的基因探测，那么对其纯度要求较高。脱盐或 OPC 纯化的寡核苷酸可能达不到要求，则 HPLC 纯化被广泛地用于这个目的。作为一种纯化树脂，阴离子交换树脂或反向树脂被用于寡核苷酸纯化。阴离子交换树脂的 HPLC 通常显示 95-98% 纯化效率，对于达到

【经验】PCR实用技巧

；若引物显然是问题的症结所在，重新设计合成新的引物。 被复性结合到模板上的引物不适合延伸。 优化MgCl2、模板DNA和dNTP的浓度；试验此PCR的pH值的范围；考虑用N-三甲基甘氨酸、N,N-二羟乙基甘氨酸或EPP等具有更低温度变异系数的化学物质替代Tris（Cheng et al. 1994）。 应用新鲜制备的热稳定DNA聚合酶。 重新纯化模板DNA以去除抑制物。 在恒定复性温度（55℃）条件下增加PCR循环数。 如果问题依然存在，添加增强剂（如10%二甲基亚砜，5% PEG

分子实验方法10: 测序技术

于引物 95℃ 2分钟。然后： 95℃ 30秒(变性)，42℃ 30秒(退火)，70℃ 1分钟(延伸)。 模式2:适用于≥24碱基或略短的GC含量≥50%的引物。 95℃ 2分钟，然后: 95℃ 30秒(变性)，70℃ 30秒(退火/延伸)。 4. 在加入终止溶液之后样品可在4℃保存过夜。 （二）、 测序凝胶板的制备 1、玻璃板的处理： 银染测序的玻璃板一定要非常清洁，一般先用温水和去污剂洗涤，再用去离子水冲洗玻璃板，除去残留的去污剂，最后用乙醇清洗玻璃板。玻璃板上遗留的去污剂微膜可能