3,4,5-三氯苯硼酸 (含不同量的酸酐)，862248-9

硅胶基硝化苯硼酸亲和色谱材料的合成及应用

　　摘  要  合成了硅胶基硝化苯硼酸亲和色谱材料，首先对间氨基苯硼酸进行硝基化，制得3氨基4硝基苯硼酸功能基团，通过 γ缩水甘油醚氧丙基三甲氧基硅烷把功能基团键合到硅胶基体上，在２０．７ ＭPa压力下装成亲和色谱预柱（35 mm×4.6 mm i.d.）。用该预柱通过六通阀后接ODS分析柱（250 mm×4.6 mm i.d.），构成中心切割二维HPLC。该系统能对含有顺二羟基结构的化合物进行在线富集，实现生物复杂样品直接进样分离分析。使用该系统对尿中多种修饰核苷进行了分离分析，以pH

【交流】抗体的生物素化标记

8.0）或0.5 mol/L硼酸缓冲液（pH 8.6），对蛋白质充分透析； ３．用1ml DMSO 溶解NHSB 1mg； ４．向1ml蛋白质溶液（即含蛋白质1mg）加入120μl NHSB溶液（即含NHSB 120 μg）； ５．在室温下持续搅拌，保温2-4小时； ６．加入9.6μL1 mol/L NH4Cl (每25 μg NHSB 加1 μl)，在室温下搅拌10分钟； ７．在4℃，对PBS充分透析，以除去游离的生物素； ８．将样品上1ml的分子筛柱，以PBS缓慢洗脱，收集

抗体的生物素化标记

。 9. 最后，样品加入叠氮钠（终浓度0.5 g/L）及1.0 g/L BSA。将结合产物置4℃，避光保存，亦可加入50%重蒸甘油，置-20℃保存。 要点： 1. 如在反应混合液中有叠氮钠或游离氨基存在，会抑制标记反应。因此，蛋白质在反应前要对0.1 mol/L 碳酸氢钠缓冲液或0.5 mol/L 硼酸缓冲液 2. 所用的NHSB及待生物素化蛋白质之间的分子比按蛋白质表面的ε-氨基的密度会有所不同，选择不当则影响标记的效率，应先用几个不同的分子比来筛选最适条件。