Western Blotting DAB显色法检测试剂盒(蓝

商品属性：

型号	LZ-01X9161
英文名称	DAB chromogenic reagent kit For Western Blotting(with)
产品规格	1盒
发货周期	1～3天

商品描述：
工作原理：聚合标记法是一种酶标记方法，其敏感性比普通酶标法有明显提高。用于 Western Blotting的免疫学检测，更能体现其优点。不仅能大量地节约一抗，更重要的是使条带更清晰，甚至能检测出普通酶标法无法检测出的微量条带。DAB 是过氧化物酶重要的显色剂之一，反应产物为不溶于水、二甲苯和醇的棕色沉淀物，适合于免疫印迹的显色反应。本产品采用特殊配方，具有操作简单，储存稳定，信号灵敏度高，持续时间长，背景低，结果易保存等优点。
试剂盒的内容：
(1)封闭试剂：10 g 蛋白干粉×1 包。
(2)浓缩抗体稀释液：20 ml×1 瓶，为10倍浓缩液。
(3)过氧化物酶标记山羊抗兔IgG，效价 1：200-400。
(4)DAB 显色试剂，含
显色剂 A：DAB×40倍浓缩液，3ml。
显色剂 B：H2O2×40倍浓缩液，3ml。
显色剂 C：×40倍 TBS 浓缩缓冲液(含氯镍)，3ml。
使用说明 需要而未提供的试剂和器材：
1．转印了蛋白样品的NC 膜或PVDF 膜：通过 SDS-PAGE 凝胶电泳分离蛋白质抗原，将 PAG 胶上的蛋白质转印到硝酸纤维素膜(NC 膜)或PVDF 膜上。
2．稀释缓冲液：使用中性稀释缓冲液即 0.02 M PBS或0.02M TBS(AR0144)配制封闭液和抗体稀释液。0.02 M PBS(pH7.2-7.6)：1000 ml 蒸馏水加 Na2HPO4 2.8 g ，NaH2PO4 0.4 g，NaCl 8.5 g。如果用的是含水磷酸盐，应加上分子式中水的含量。0.02M TBS(pH7.2-7.6)：1000ml 蒸馏水中加 Tris 2.42g,NaCl 9g; 纯乙酸或浓盐酸调节 pH 值(7.2-7.6)。
3．洗涤缓冲液：每 1000ml 中性稀释缓冲液中加入 0.5 ml Tween20 即可。
4．一抗：选择适合的一抗，用抗体稀释液稀释相应的一抗，一般特异性抗体工作浓度为1μg/ml,具体的稀释度取决于特异性的一抗和膜上的抗原的量。
5．摇床：膜的封闭、抗体孵育和洗涤都需平稳摇晃，需在摇床上操作。
6．相机：记录结果。
操作程序：
1.通过聚丙烯凝胶电泳分离蛋白样本和分子量标准。
2.将蛋白样本转移至硝酸纤维素膜或PVDF 膜上。
3.封闭硝酸纤维膜：用封闭蛋白干粉 2 g,加稀释缓冲液 100 ml，20-37℃封闭 1-2 小时。用量以浸没整张膜为准。
4.用洗涤缓冲液洗涤硝酸纤维素膜 5分钟,1次。
5.配制抗体稀释液：取 90 ml 稀释缓冲液加 1 g 封闭蛋白干粉和 10 ml浓缩抗体稀释液即可。一抗、二抗均用此稀释液稀释。
6.硝酸纤维膜孵育一抗：用抗体稀释液稀释相应的一抗，一般特异性抗体浓度 1μg/ml,20-37℃孵育2 小时左右。如果缺乏特异性的条带或阳性不强，应提高一抗的浓度；如果有非特异性的条带，应提高一抗的稀释度。
7.用洗涤缓冲液振荡洗涤硝酸纤维素膜 3次,每次 5分钟。
8.硝酸纤维膜孵育二抗：用抗体稀释液稀释相应的酶标二抗，效价 1：200-400。37℃孵育一个半小时左右。用户可根据实际染色情况对稀释度做适当调整。
9.用洗涤缓冲液振荡洗涤硝酸纤维膜 4次,每次 5分钟。
10.DAB 显色:使用 DAB 显色试剂。按每 2 ml 蒸馏水加显色剂 A，B，C 各１滴，混匀。混匀后加至膜上。室温显色。一般显色 1－30分钟。
若无背景出现则可继续显色。显色后用蒸馏水洗涤以终止反应。
11.观察，照相。

储存条件：
低温运输、-20℃保存(但溶液B也可以常温运输和保存)，
有效期一年。

注意事项：
注：本品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他用途！

下列是公司正在出售的产品：
H-Aib-Ome.HCl 25g 100g  人解脲脲原体抗体检测ELISA
Boc-N-Me-Tyr(Bzl)-OH 5g 25g 1g  人解整合素样金属蛋白酶12检测ELISA
Fmoc-Ile-OPfp 5g 25g  人解整合素样金属蛋白酶33检测ELISA
Boc-Cys(Acm)-OH 25g 100g  人解整合素样金属蛋白酶9检测ELISA
Z-Lys(Boc)-OH 25g 100g  人金葡菌肠毒素检测ELISA
Ac-Tyr-OEt.H2O 25g  人金属硫蛋白检测ELISA
3-(2-Pyridyl)-D-Alanine 25g 100g 5g 1g  人金属肽酶含血小板反应蛋白1检测ELISA
Fmoc-Phe(4-Cl)-Wang resin 5g 25g  人紧密连接蛋白1检测ELISA
H-D-Phe(4-F)-OH .HCl 5g 25g  人精氨酸酶检测ELISA
Fmoc-Phe(4-NO2)-OH 5g 25g  人精子蛋白17检测ELISA
Ac-DL-Trp-OH 5g 25g  人精子相关抗原9检测ELISA
H-D-1-Nal-OH 5g 25g  人静止素Q6硫基氧化酶1检测ELISA
Z-N-Me-Phe-OH 5g 25g  人生长分化因子15检测ELISA
Fmoc-Threoninol(tBu) 5g 25g  人巨噬细胞集落刺激因子检测ELISA
Z-Asp-OtBu 25g 100g  人巨噬细胞来源趋化因子检测ELISA
Fmoc-β-homo-Arg(Pbf)-OH 25g 100g 5g  人巨噬细胞炎性蛋白1α检测ELISA
H-Asn-2-Chlorotrityl Resin 5g 25g  人巨噬细胞炎性蛋白2检测ELISA
Boc-Gly-N(OMe)Me 5g 25g  人巨噬细胞炎性蛋白3α检测ELISA
Bz-Glu-OH 25g 100g  人巨噬细胞炎性蛋白3β检测ELISA
Fmoc-Glu-OH 25g  人巨噬细胞移动抑制因子检测ELISA
Western Blotting DAB显色法检测试剂盒(蓝色)(兔IgG)F 人聚集蛋白检测ELISA
H-D-Ala-OMe.HCl 5g 25g  人抗BP180抗体检测ELISA
Boc-D-Trp-OH 25g 100g  人抗DNA酶B抗体检测ELISA