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- 2026年01月01日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名：
pNL1.2 [NlucP] Vector
- 供应商：
普洛麦格
- 规格：
20μg
说明：
NanoLuc® (Nluc ) luciferase (NanoLuc® 萤光素酶) 是一个经过基因工程改造的小分子酶(19.1kDa)，是性能卓越的生物发光报告基因。该酶比萤火虫(Photinus pyralis ) 或海肾(Renilla reniformis )萤光素酶的发光亮100 倍，它使用一种新型底物——furimazine，可产生高强度、辉光型发光。生物发光反应不依赖ATP，同时抑制背景发光以获得最高检测灵敏度。目前已构建多种类型的NanoLuc® 萤光素酶报告基因载体，以满足不同的实验需求。非融合的Nluc 提供了最大的光输出和灵敏度，NanoLuc®-PEST(NlucP ) 将蛋白表达水平变化与转录活性改变密切偶联，并增加信噪比，融合N- 末端分泌信号(secNluc ) 的NanoLuc®萤光素酶适用于分泌型报告基因试验。使用Nano-Glo® 萤光素酶检测试剂，发光量在跨越1,000,000 倍的酶浓度范围内呈线性关系，且信号半衰期≥ 2 小时。NanoLuc® 萤光素酶具有许多使之成为出色报告基因蛋白的物理
特性：
• 分子量非常小，单体酶(171 个氨基酸；513bp)
• 热稳定性高(Tm=60℃ )
• 在很宽的pH 范围内有活性(pH 值6-8)
• 没有翻译后修饰或二硫键
• 均匀分布在细胞中
• 发射光谱非常适合于生物发光共振能量转移(BRET；λmax=465nM)。为满足利用报告基因研究转录调控，我们提供多种表达不同类型NanoLuc® 萤光素酶( 非融合型Nluc ，PEST 不稳定型NlucP ，分泌型secNluc ) 的质粒载体。不同的pNL 载体用途如下：
• pNL1：克隆已知或预测的启动子区域
• pNL2：克隆已知或预测的启动子区域，并通过潮霉素(Hygromycin) 筛选建立一个稳定克隆的细胞系
• pNL3：克隆不需要基本启动子的结合位点或应答原件( 如pNL3.2.NF-κB-RE 载体)
• 提供非融合和分泌型Nluc 对照质粒。pNL 载体系列以pGL4 为基础设计，以方便从现有的质粒上进行序列转移。载体骨架设计还去掉了许多转录因子结合位点和其他潜在的调控元件以减少反
常结果的发生。对Nluc 基因突变体进行了密码子优化，并去除了许多潜在调控元件或其他不必要的功能( 如常见的限制性内切酶位点)。
储存条件：储存于-20℃。
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文献和实验to the growing cells at a final concentration of 20 μg/ml. Construction of the pSC101BADγβαA[hygro] vector The pSC101BADγβαA[hygro] plasmid was based on the pSC101BADγβαA[tet] vector (GeneBridges) and was constructed by standard Red/ET
Construction and Characterization of Adenovirus Vectors
vector with 1 µL of PmeI in a total volume of 20 µL overnight at 37°C. 3. Add 3 µL of PmeI-digested shuttle and 3.3 µL of 0.1 µg/µL supercoiled pAdEasy to a 13-mL capped polypropylene tube. Chill on ice. Add 3 µL of PmeI-digested
内的，而酶只有在甘油浓度 具体操作如下：在 1.5 mL 离心管中依次加入DNA（1 μg/μl）20 μg10× 酶切 buffer 4.0 μl限制性内切酶（10 U/μl）5.0 μl加 ddH2O 至 500 μl在最适温度下消化 1-3 hr。消化结束时可取 5 μl 电泳检测消化效果。如果消化效果不好，可以延长消化时间，但超过 6 hr 已没有必要。或者放大反应体积，或者补充酶再消化。如仍不能奏效，可能的原因是 DNA 样品中有太多的杂质，或酶的活力下降。消化后的 DNA 加入 1/10
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